Hoechst 33342是一种蓝色荧光染料，可以穿透细胞膜，对细胞的毒性较低。它常用于细胞凋亡检测、细胞核染色和DNA染色。本文将介绍如何正确使用Hoechst 33342进行细胞核染色。
1. 对于固定的细胞或组织：
a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其他染色，则直接进行Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可；对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
2. 对于活细胞或组织：
a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。Hoechst 33342对人体有害，请注意适当防护。本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
[1] Hoechst 33342 染色液（10ug/mL 即用型）使用说明
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