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如何使用柱式吸附试剂盒快速提取酵母基因组DNA? 1

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本试剂盒采用DNA吸附柱和独特的溶液系统,适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。每次抽提约3ml处于指数生长期的酵母培养液,可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化的DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。酵母细胞经过lyticase处理去除细胞壁后,独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内的硅基质膜。通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份

缓冲液YB————————————20ml

结合液CB————————————11ml

漂洗液WB————————————15ml

抑制物去除液IR—————————25ml

洗脱缓冲液EB——————————15ml

Lyticase(10U/μl)———————2500U

蛋白酶K冻干粉(20mg/ml)—————20mg

吸附柱AC————————————50个

收集管(2ml)——————————50个

产品特点

1.离心吸附柱内的硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好,克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

3.快速,简捷,单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。

4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项

1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.需要自备乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇。

3.开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。

4.结合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.用户需要自备Sorbitol buffer(1M 山梨醇,0.1M Na2EDTA,14 mMβ-巯基乙醇)。

配制方法:在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇,加入200 ml 0.5M Na2EDTA (pH 8.0),不需要调节PH值,定容到1L,4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。

6.菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml,由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大,以上仅供参考。

7.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

主要参考资料

[1] 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附)产品说明书

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