线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)适用于从各种原代或传代动物细胞和各种实体组织中提取总蛋白。该试剂盒具有简单方便、快速高效的特点，提取过程可在1小时内完成。
为了保证提取的蛋白质的高纯度，试剂盒中含有能够有效溶解细胞膜组份的独特配方，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。同时，试剂盒中还含有蛋白酶抑制剂混合物，可以阻止蛋白酶对蛋白的降解。
与其他蛋白提取试剂盒不同的是，该试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，也不含有可能影响质谱实验的组份，如SDS、Triton X-100、chaps等。因此，通过透析或脱盐处理后得到的蛋白质样品基本不含有去垢剂、高浓度盐等影响，可以满足下游任意的蛋白质组学相关研究。
1. 收集细胞，在4℃，2000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每5×106-1×107个细胞中加入500μl冷的总蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。
4. 在4℃，12000g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细胞总蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
7. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
该试剂盒可以用于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系的建立，为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。
研究方法：以茭白为试验材料，比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条pH范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。
研究结果：差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白，使用17 cm、pH 3-10的IPG胶条，1.0 mg上样量，12%SDS-PAGE进行双向电泳，茭白线粒体蛋白主要分布在pH 4-8范围内，pH 3-4和pH 8-10范围内蛋白点较少。进一步选用pH 4-7和pH 5-8的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳，分离效果均明显提高，且pH 4-7范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰，蛋白点分辨率较高。
[1] Proteomic analysis of changes in mitochondrial protein expression during fruit senescence. Qin Guozheng, Wang Qing, Liu Jia, Li Boqiang, Tian Shiping. Proteomics. 2009.
[2] A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the protein dye binding. Bradford M M. Analytical Biochemistry. 1976.
[3] Changes in the mitochondrial proteome during the anoxia to air transition in rice focus around cytochrome-containing respiratory complexes. Millar A, Harvey T, Trend Alice E, Heazlewood Joshua L. Journal of Biological Chemistry. 2004.
[4] Analysis of the Arabidopsis mitochondrial proteome. Harvey Millar A, Sweetlove Lee J, Philippe Giege, et al. Plant Physiology. 2001.
[5] 杜传来, 罗海波, 彭昕, 王韦华, 郁志芳. 茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立. 南方农业学报, 2016, 47(03): 332-336.
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