茚三酮是一种常用的显色剂,用于检测α-氨基酸与多肽。它与α-氨基酸反应产生蓝、紫或紫红色产物,也可以与伯胺、一级其他氨基酸、氨、铵盐反应。这种反应非常特异,因此可用作氨基酸色谱分析的显色剂。
在制备薄层色谱的显色溶液时,为了提高显色反应的灵敏性,常常加入碱(促进亚胺生成)或还原剂(还原醛,促进氨基茚二酮生成),或者加入显色物质的稳定剂(如Cd2+、Cu2+)。
1. 喷洒溶液:
方法1:将95mL 0.2%茚三酮的正丁醇溶液中加入5mL醋酸。
方法2:将0.2-0.3g茚三酮溶解于90mL异丙醇或正丁醇(用水饱和),然后加入5mL 2,4,6-三甲基吡啶。
方法3:在方法2的基础上再加入5mL醋酸。
2. 浸泡溶液:
将0.2-0.3g茚三酮溶解于95mL丙酮中,然后加入5mL 2,4,6-三甲基吡啶。
3. 检出手续:
将显色溶液喷洒或浸泡在薄层板上,然后加热80-90℃30-60分钟。
4. 结果:产生蓝色斑点。
5. 讨论:
为了稳定茚三酮复合物的颜色,可以喷洒含有1mL硝酸铜的饱和溶液、0.2mL 1%硝酸、4mL水,并用甲醇稀释到100mL的混合溶液,然后干燥。