灵芝酸是灵芝中主要的三萜类物质,具有多种类型,如灵芝酸A、B、C、D、E、F、G、I、L、ma、md、mg等。灵芝酸主要是四环三萜,是高度氧化的羊毛甾烷。灵芝酸具有抑制细胞组织胺释放的作用,能够增强消化系统各种器官的功能,尤其是灵芝酸G,在诱导肥大细胞活化和参与先天性免疫活动中起着重要的作用。
一种定性分析灵芝孢子油中灵芝酸G的检测技术被报道。该技术利用拉曼光谱特征峰信号,选择555cm-1(±3cm-1)、1176cm-1(±3cm-1)作为特征拉曼峰,实现了快速、准确的定性分析,整个检测过程只需10分钟。该方法采用甲醇超声波提取灵芝孢子油中的灵芝酸G,并利用表面增强激光拉曼光谱特征峰信号进行快速定性。具体步骤如下:
准确称取10mg灵芝酸G标准品,用无水甲醇定容到10mL,得到1000μg/mL的标准待测液。
a. 称取适量样品,加无水甲醇振荡,置于超声萃取仪中超声10分钟。
b. 将提取液摇匀过滤,滤液留待使用。
所使用的无水甲醇与样品的比例为V:m=10-5:1(mL/g),优选8-5:1(mL/g)。
取适量滤液并加适量浓硫酸摇匀后,从中取适量作为待测液,依次加入表面增强试剂和酸化剂,记录555cm-1(±3cm-1)、1176cm-1(±3cm-1)是否出现特征峰。
浓硫酸与滤液的体积比为1:1-5,优选1:2。
表面增强试剂可以选择金纳米溶胶或银纳米溶胶,优选金纳米溶胶。
酸化剂为促凝剂,使用2mol/L硝酸溶液。
表面增强试剂与待测液的体积比为1-10:1,优选2-5:1。
酸化剂与待测液的体积比为1:1-10,优选1:1-5。
该方法采用专用并固化于便携式拉曼光谱仪的专用软件,实现了灵芝孢子油中灵芝酸G的超快速、低成本、现场鉴别。一个样品的检测时间小于15分钟,操作简单,不需要操作人员具备较强的专业背景,读数直观,可直接从仪器界面上读取数值。
[1] [中国发明] CN202010454688.6 一种灵芝孢子油中灵芝酸G的快速检测方法