小鼠淋巴瘤细胞的特征和应用？ ¹

背景信息^[1-3]

小鼠淋巴瘤细胞是从C57BL小鼠中诱导的淋巴瘤中分离出来的。这些细胞对氢化可的松具有抗性，对PHA敏感。此外，还存在一个亚株(EL4.IL-2,ATCC TIB-181)，该亚株能够产生高水平的IL-2。实验结果显示，这些细胞不含肢骨发育畸形病毒(鼠痘)。

小鼠淋巴瘤细胞的胞体直径约为12~15μm，呈圆形或类圆形。胞核椭圆形，常偏向一侧。核染色质紧密而均匀，无核仁，胞浆较多，呈透明的淡蓝色，常有少许嗜天青颗粒。

小鼠淋巴瘤细胞的形态

淋巴细胞是免疫反应的核心。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同，可分为T细胞、B细胞和NK细胞三类。

T淋巴细胞在血液循环中到达胸腺，在胸腺激素的作用下成熟，而B细胞则在骨髓中分化成熟。

当受到抗原刺激后，T淋巴细胞会转化为淋巴母细胞，再分化为致敏T淋巴细胞，参与细胞免疫。T细胞的免疫功能主要是抵抗胞内感染、瘤细胞和异体细胞等。

B淋巴细胞首先转化为浆母细胞，然后分化为浆细胞，产生并分泌免疫球蛋白（抗体），参与体液免疫。B细胞的功能包括产生抗体、呈递抗原以及分泌细胞内因子参与免疫调节。

NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应，具有杀伤靶细胞的作用。

应用领域^[4][5]

小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究

本研究旨在阐明苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ诱导小鼠淋巴瘤细胞突变的分子机制。

通过采用“小鼠淋巴瘤细胞L5178Y/TK+/-致突变检测方法”（L5178Y/TK+/-Mouse Lymphoma Mutation Assay, MLA），我们获得了胸苷激酶基因（tk）突变克隆。

为了检测11号染色体上含有功能性tk基因的DNA断裂情况，我们挑选了对照组和经不同浓度苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ处理的小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2细胞，提取DNA，并使用基于PCR的杂合性缺失（Loss of heterozygosity, LOH）分析方法来研究11号染色体上tk位点的杂合性缺失情况。

最后，我们使用Hoechst33342/PI双荧光活染法检测经苏丹Ⅲ和Ⅳ处理的细胞凋亡情况。

实验结果显示，150μg/mL苏丹Ⅰ诱导的突变体中，大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为85%（17/20）和95%（19/20），所有克隆发生LOH的比例为90%（36/40）；150μg/mL苏丹Ⅲ诱导的突变体中，大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为85.2%（23/27）和100%（15/15），所有克隆发生LOH的比例为90.5%（38/42）；500μg/mL苏丹Ⅳ诱导的突变体中，大克隆和小克隆发生LOH的比例分别为83.3%（15/18）和90.9%（19/22），所有克隆发生LOH的比例为85%（34/40）。Hoechst33342/PI双荧光活染法的结果表明，在苏丹Ⅲ作用12、24和48小时后，细胞的凋亡率分别为10.5%、29.5%和52.5%；在苏丹Ⅳ作用12、24和48小时后，细胞的凋亡率分别为14.5%、28.0%和49.5%。随着诱导时间的延长，细胞的凋亡率增加，呈现时间依赖关系。

参考文献

[1] Shigeko Morimoto, Takeshi Kato, Masamitsu Honma, Makoto Hayashi, Fumio Hanaoka, Fumio Yatagai. "Detection of Genetic Alterations Induced by Low-Dose X Rays: Analysis of Loss of Heterozygosity for TK Mutation in Human Lymphoblastoid Cells." Radiation Research. 2002(5).

[2] P. David Josephy, Petr Gruz, Takehiko Nohmi. "Recent advances in the construction of bacterial genotoxicity assays." Mutation Research-Reviews in Mutation Research. 1997(1).

[3] Johannes Doehmer, Anneliese Schneider, Markus Faβbender, Volker Soballa, Wolfgang A. Schmalix, Helmut Greim. "Genetically engineered mammalian cells and applications." Toxicology Letters. 1995.

[4] Chuan-Yuan Li, David W. Yandell, John B. Little. "Molecular mechanisms of spontaneous and induced loss of heterozygosity in human cells in vitro." Somatic Cell and Molecular Genetics. 1992(1).

[5] 董韡. "苏丹Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ诱导小鼠淋巴瘤细胞突变机制的研究." 上海交通大学, 2009.