大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒的应用及样本处理方法？ ¹

背景信息

本文介绍了大鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA试剂盒的应用及样本处理方法。CD30ELISA试剂盒是一种双抗体夹心法，用于测定标本中大鼠白细胞分化抗原30(CD30)的水平。

CD30ELISA试剂盒的原理是将纯化的大鼠白细胞分化抗原30(CD30)抗体包被在微孔板上，形成固相抗体。然后依次加入CD30和HRP标记的CD30抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。通过测定在450nm波长下的吸光度（OD值），可以计算样品中大鼠白细胞分化抗原30(CD30)的浓度。

样本处理及要求

为了获得准确的结果，不同类型的样本需要进行相应的处理：

1.血清

室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆

根据标本要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3.尿液

用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照相同方法处理。

4.细胞培养上清

检测分泌性成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内成分时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，使细胞破坏并释放细胞内成分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

应用及研究目的

研究不同持续时间低氧后运动对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响

本研究采用不同持续时间低氧暴露后的大鼠进行常氧下中等强度运动模型，旨在探讨不同持续时间低氧暴露后运动条件下大鼠胸腺组织细胞的形态变化、细胞凋亡小体数目、胸腺素和CD30含量的变化，以及凋亡通路和相关因子蛋白及mRNA表达的影响。通过研究，揭示不同持续时间低氧后运动对胸腺细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。

方法：将60只SD大鼠按体重随机分为6组，包括正常对照组、低氧暴露8小时组、低氧暴露12小时组、常氧运动组、低氧8小时暴露后运动组和低氧12小时暴露后运动组。其中，D、E、F组的大鼠在PT动物跑台上每天进行1小时的中等强度运动。

运动结束后，将B、E组和C、F组的大鼠分别放入氧浓度为12.5%的低氧舱内进行8小时和12小时的低氧暴露，共持续4周（每周5天）。实验结束后24小时，用ELISA法检测胸腺组织中胸腺素和CD30的水平；制备胸腺组织石蜡切片，进行HE染色和TUNEL标记法观察胸腺组织细胞的形态学变化和凋亡情况；利用免疫组化法检测胸腺组织细胞HIF-la、Bcl-2和Bax因子的蛋白水平；通过RT-PCR法检测胸腺细胞HIF-la、Bcl-2和Bax的mRNA水平。

参考文献

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[5]刘勇.不同持续时间低氧后运动对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响[D].湖南师范大学,2010.