提问
盖德化工网  >  盖德问答  >  如何提高Wester...

如何提高Western样品的蛋白浓度?

最近从细胞中提了几次蛋白,考马斯亮蓝法测蛋白浓度后发现蛋白浓度都很低,想要达到电泳时上样50μg蛋白的要求就不能达到上样量最大不能超过15μl(bio-rad电泳仪)的要求,怎么办呢?求帮忙!如何将蛋白浓度提高啊?我是在六孔板里裂解的细胞,待孔内细胞长满时每孔加了100μl裂解液,是因为细胞量太少吗?那么可不可以减少每孔加的裂解液的量?还是因为裂解得不够充分应当增加裂解液的用量啊?又或者是因为裂解液有问题吗?我们是自己配的RIPA裂解液:Tris-Hcl 50mM,pH7.4,NP-40 1%,脱氧胆酸钠0.5%,Nacl 150mM,EDTA 1mM,SDS 0.1%。是没有加亮氨酸转肽酶等导致蛋白被分解的缘故吗?

0评论 +关注
共1个回答
如果改用RIPA蛋白裂解液,蛋白浓度会提高很多,裂解的也会更充分一些
相关问题
16S菌种鉴定菌株总是不纯!求助大神指点迷津!? 4个回答
蛋白纯化用的最多的方法? 2个回答
pcr空白对照弥散,样本整体弥散? 7个回答
毕赤酵母表达蛋白降解? 1个回答
SacB筛选问题? 1个回答
编辑推荐
三价铬溶液颜色问题? 15个回答
能否用离心代替旋蒸去除乙醇? 2个回答
想请教下靛蓝染料在紫外分光光度计下吸收的问题? 4个回答
硫酸钙结垢,用什么清洗掉? 4个回答
氰基取代苯环上的卤素的反应条件? 0个回答
 
请填写举报原因
选择举报原因
 
增加悬赏
剩余能量值
能量值