提问
盖德化工网  >  盖德问答  >  关于血浆总RNA提取...

关于血浆总RNA提取的一些问题,有没有人解答下?

最近在做血浆RNA提取的实验,发现了几个问题,求小伙伴们帮忙指导一下:
1、当天早上从临床采集的全血血样(EDTA抗凝),一般会在常温放几个小时,有时候放在4度冰箱,然后中午再开始做RNA提取,血样这样放置会有影响吗?
2、全血用4°C,3000rpm,离心10min,取上层血浆。取到上层血浆之后,需要到12000rpm离心之后再取一定量来做实验吗?
3、提取方法是Trizol法,加Trizol、氯仿、异丙醇75%乙醇这些常规步骤之后,晾干20min,加入25ul无核酶水,然后有必要在56°C孵育吗?
4、每次提取的血浆总RNA,OD都是1.1-1.5,浓度值都在10 ng/ul左右,甚至更低(丧心病狂T_T),是RNA降解了吗?

5、提取好的RNA样品怎样保存?放到-80°C吗?如果是,一般可以保存多久?

0评论 +关注
共1个回答
1、mRNA稳定性较差,常温放置很容易降解,具体降解程度还需要实验检测;
2、需要两次离心;3000r 4°C 10min离心分离血浆后,取血浆再到12000r 4°C 15min离心,第二次离心的目的是去除所有的细胞碎屑之类的污染物。两步离心后再-80保存。3、不需要孵育;
4、OD值只是质控的一个指标,如果RT能成功当然无所谓,怕的是OD不合格会影响RT,所以可以考虑先过柱纯化后继续往下做;
5、-80保存,跟第一个问题一样,肯定也是新鲜最好,久放毕竟会有一定程度的降解。
相关问题
16S菌种鉴定菌株总是不纯!求助大神指点迷津!? 4个回答
蛋白纯化用的最多的方法? 2个回答
pcr空白对照弥散,样本整体弥散? 7个回答
毕赤酵母表达蛋白降解? 1个回答
SacB筛选问题? 1个回答
编辑推荐
三价铬溶液颜色问题? 15个回答
能否用离心代替旋蒸去除乙醇? 2个回答
想请教下靛蓝染料在紫外分光光度计下吸收的问题? 4个回答
硫酸钙结垢,用什么清洗掉? 4个回答
氰基取代苯环上的卤素的反应条件? 0个回答
 
请填写举报原因
选择举报原因
 
增加悬赏
剩余能量值
能量值