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急急急:HPLC使用前中后相关问题请教,谢谢?

急急急向各大神求助:? ? 我现在利用HPLC测面粉中的维生素B1、B2、B6和B9的含量,第一次接触HPLC有几个问题求教大神们:1、测定的标准曲线单位是μg/ml,但最终论文中出现的应是μg/g,想问下这该怎么换算呢?文章中也没有提及如何换算,该怎么处理才好呢?2、测定维生素B6时需要使用离子对试剂(庚烷磺酸钠),测定维生素B9时需要使用离子对试剂(四丁基磷酸二氢铵),我的柱子是新柱子,请问使用离子对试剂是否对柱子有伤害?应该如何减少对柱子的损伤?在使用了离子对试剂的缓冲液与甲醇做流动相后,是否不能再使用该柱子测定不含离子对作为流动相的物质么?每次使用完后应该如何冲洗,冲洗多长时间才能确保将离子对冲出去?3、测定维生素B9时,需要用SPE进行萃取,我的SPE柱子是HYPERSEP C18 500MG/3ml 的,这个可以重复使用么?我查询了下说萃取分为四部:柱的活化和平衡、上样、冲洗和洗脱感兴趣的化合物,冲样是用一种强得能洗脱杂质而又弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质;洗脱是用溶剂将被吸附在萃取柱上的化合物洗脱在溶液里,也就是说上样后得到的液体和冲样得到的液体要丢弃掉,洗脱的液体留下是吧?? ? 如果大神们看到我的提问,求回复指导下,谢谢众大神。
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共3个回答
1. 一般情况下 都会用ug/ml 为什么非要用 ug/g2. 我分析用很多离子对, 一般用水相慢慢把离子对换出来。比如你的流动相是 离子对缓冲:甲醇(60:40)。 做完实验后慢慢换成 水:甲醇 60:40。 然后进行一般的柱子日常维护, 比如10%或20% 甲醇冲洗。3. 一般不重复使用,a) 面粉中的大分子可能被吸附在柱子上很难洗脱,影响柱效。b)下一次洗脱B6中可能会引入杂质。 一般用TLC 检测是否目标化合物是否洗脱出来(洗脱顺序可以先用TLC 估量一下)。然后收集洗脱液,合并旋蒸。
1、一般我们标曲直接使用μg/ml,如果你真要跟最终论文单位一致,可以查询下液体密度换算,一般μg/g我们是用在固体上的。2、离子对试剂对柱子还是有一定的损伤,这个是公认的,没啥找较少损伤,最多你离子对试剂的量少些。所以一般我们实验室拿一根柱子做过离子对色谱法后,这根柱子就只用于离子对色谱法,不再它用。但是离子对色谱法确实非常好用,就是可惜的是柱平衡时间也较长。冲洗的话和正常C18柱冲洗一样,就是每一步冲洗时间延长一倍即可。3、答:一般固相萃取小柱是不可重复使用的,但因为SPE柱子造价不低,所以之前方法摸索的时候我倒是有重复使用,但这不是正确做法。确实是取洗脱液,
1、单位无所谓,一般固体溶液用ug/ml 的多,只要你做出来标准曲线的线性好就行。2、不论是否使用了离子对试剂,一般反相柱都用10%的甲醇溶液或乙腈溶液冲洗,再用纯甲醇或乙腈冲洗。1ml的流速冲洗半小时差不多了。3、没用过,不知道
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