为了制备小鼠IgG蛋白，我们使用了纯化的基因工程抗原HIV-p24来免疫雌性6周龄BALB/C小鼠。每只小鼠免疫30μg抗原，通过在四肢淋巴结附近皮下多点注射的方式，每隔30天免疫1次，共进行了3次免疫。第一次免疫时与完全弗氏佐剂混合，后两次与不完全福氏佐剂混合。在融合前的3天进行了一次加强免疫。我们使用小鼠骨髓瘤SP2/0细胞和免疫小鼠的脾细胞按常规PEG方法进行融合，然后通过有限稀释法克隆细胞，并使用间接ELISA法筛选特异性抗体。阳性细胞连续克隆4次，直到抗体分泌阳性率达到100%，从而确定了稳定的细胞株。我们使用间接ELISA法检测了单抗细胞上清。接下来，我们将抗HIV-p24单抗细胞注射到小鼠的腹腔，以制备腹水。获得的腹水经过一次50%饱和硫酸铵沉淀，然后进行两次30%饱和硫酸铵沉淀，将沉淀蛋白溶解于pH=7.4的PBS液中，进一步使用DEAE52离子交换进行纯化，将pH值调整为7.0。最后，使用紫外分光光度计测定抗体蛋白的浓度，蛋白贮存液浓度为1mg/mL。
我们将不同厂家的小鼠IgG分别配制成不同的抗HCV-cAg酶结合物溶液，并使用酶标法进行检测。具体结果见表1。尽管每个厂家标示的浓度均大于95%，但由于制备方法、杂质含量和蛋白纯度等因素的不同，检测结果会有所差异。我们还将不同厂家的小鼠IgG分别配制成不同的抗HCV-cAg酶结合物溶液，并在破坏实验后使用酶标法进行检测。结果见表2。由于重金属杂质含量和小鼠IgG与抗原结合程度的不一致等因素的影响，其稳定性检测结果也会有所不同。
[1]徐宗伟,房丰洲,赵铁强,董申.碳纳米管探针对小鼠IgG蛋白的纳米表征[J].天津大学学报,2009,42(10):919-922.
[2]刘群奇,张桂平,胡道奇.不同小鼠IgG对丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫法检测的影响[J].临床输血与检验,2011,13(04):324-325.
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