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如何构建pEGFP-Notch1-NICD-r质粒并观察其在COS-7L细胞中的功能? 1

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pEGFP-Notch1-NICD-r质粒是一种含有CMV强启动子的基因质粒,用于表达EGFP-Notch1-NICD融合蛋白。该蛋白中的Notch1受体是一种跨膜大分子,主要参与细胞命运选择的发育过程。Notch1 intracellular cytoplasmic domain(NICD)是在G1743和V1744部位发生水解释放产生的活性片段,可以被转运进核并激活下游基因的表达。Notch1在细胞的增殖、分化、程序性死亡、形态发生和器官形成等重要过程中发挥着重要作用。

我们通过转染pEGFP-Notch1-NICD-r质粒到COS-7L细胞中,观察到绿色荧光蛋白定位在细胞核中,这提示克隆的NICD基因适合用于进一步研究分裂后神经元的功能。

关于pEGFP-Notch1-NICD-r大鼠基因质粒的基本信息

启动子: CMV promoter

复制子: pUC ori, F1 ori, SV40 ori

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 基因文库质粒;大鼠基因质粒;大鼠真核质粒

质粒大小: 7079bp

质粒标签: C-EGFP

原核抗性: Kan

真核抗性: G418

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃

表达宿主: 293T等哺乳细胞

培养条件: 5%CO2,37℃

诱导方式: 无需诱导

5'测序引物: pEGFP-N-5(TGGGAGGTCTATATAAGCAGAG)

3'测序引物: pEGFP-N-3(CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG)

关于pEGFP-Notch1-NICD-r大鼠基因质粒的质粒图谱

主要参考文献

[1]金卫林 廖柏松 鞠躬。大鼠Notch 1胞质段的克隆及其表达 生物化学与生物物理进展 Prog. Biochem Biophys.

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