背景[1-3]
HS 578T人乳腺癌细胞源自乳房癌，它与正常成纤维细胞样细胞株Hs 578Bst起源于同一位患者。Hs 578T细胞株最初是多角形的，但在传代过程中选择并克隆了星形的细胞形态。电镜下观察到酪蛋白颗粒聚集，桥粒，紧密连接，脂质体和光滑内质网小泡。与Hs 578Bst一样，未检测到雌激素受体和内生病毒。
HS 578T人乳腺癌细胞
培养步骤：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
传代方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
应用[4][5]
用于1，25二羟维生素D3联合塞莱昔布对乳腺癌细胞株Hs578T的增殖抑制及凋亡诱导作用的研究
研究1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]（VitD3）联合塞莱昔布（CELE）对乳腺癌细胞株Hs578T的增殖抑制及凋亡诱导作用。
方法：采用四唑氮蓝比色（MTT）法检测细胞增殖抑制,计算抑瘤率;流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率;HE染色以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记（TUNEL）法观察VitD3联合CELE对肿瘤细胞凋亡的影响并计数凋亡细胞;
利用细胞免疫化学方法结合显微图像分析系统定量检测肿瘤细胞中:1)细胞增殖指标Ki-67的表达;2)凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的变化;3)与侵袭相关因子VEGF的表达;4)凋亡抑制基因survivin;4)观察细胞粘附分子COX2以及维生素D受体VDR的表达。
结果：10-7 mol/L VitD3联合5×10-5mol/L CELE、10-8 mol/L VitD3联合5×10-5mol/L CELE联合用药组作用于乳腺癌细胞株Hs578T后:1)通过MTT法测得72h对Hs578T细胞的抑瘤率分别为53.0%、48.0%;A值分别为0.517±0.045、0.572±0.022,能显著抑制Hs578T肿瘤细胞的生长,有统计学意义;
2) 流式细胞术显示72h后实验组细胞凋亡率显著高于对照组细胞凋亡率;
3) 细胞周期分析实验组可分别造成肿瘤细胞S期、G0/G1期阻滞;
4) 细胞免疫化学SP法显示实验组凋亡相关基因Bax增高,Bcl-2降低,与侵袭相关因子VEGF的表达下降以及VDR在肿瘤细胞核中的表达。
结论1)10-7 mol/L的VitD3联合5×10-5mol/L CELE与10-8 mol/L的VitD3联合5×10-5mol/L CELE用药在体外可以显著抑制乳腺癌细胞株Hs578T增殖,其机制可能为通过下调Ki-67的表达而抑制肿瘤细胞增殖活性;
2) 联合用药可改变肿瘤细胞周期时相分布,使肿瘤细胞阻滞于S期、G0/G1期;
3) 联合用药能诱导乳腺癌细胞株Hs578T调亡,其机制可能为通过抑制Bcl-2、促进Bax的表达,改善Bcl-2/Bax的平衡;
4)联合用药能抑制与侵袭相关因子VEGF的表达,提示联合用药具有抑制乳腺癌细胞株Hs578T侵袭的潜能。
参考文献
[1]Rho/ROCK pathway as a target of tumor therapy[J].R.Rattan,S.Giri,A.K.Singh,I.Singh.J.Neurosci.Res..2006(2)
[2]Suppression of P-glycoprotein gene expression in Hs578T/Dox by the overexpression of caveolin-1[J].Hua Zhu,Chuanxi Cai,Jianwen Chen.FEBS Letters.2004(3)
[3]Overexpression of caveolin-1 increases plasma membrane fluidity and reduces P-glycoprotein function in Hs578T/Dox[J].Chuanxi Cai,Hua Zhu,Jianwen Chen.Biochemical and Biophysical Research Communications.2004(3)
[4]Depletion of membrane cholesterol causes ligand-independent activation of Fas and apoptosis[J].Robert Gniadecki.Biochemical and Biophysical Research Communications.2004(1)
[5]汪勤.1，25二羟维生素D_3联合塞莱昔布对乳腺癌细胞株Hs578T的增殖抑制及凋亡诱导作用[D].安徽医科大学,2009.
