HL-60细胞用lipo2000的转染效率应该是可以的,可以到70%左右,不需要用电转,磷酸钙法也可以有40-50%的
只是在操作上需要注意:
1,细胞铺板时的状态很重要,应该在铺板前尽量消化为单细胞悬液,trypsin+EDTA充分吹打即可
2,转染前1天铺板,待转染时密度刚好达到80-90%,不能太低,但是也不能长过(细胞成团,堆积)。最好是刚刚长满,此时还在对数生长期
3,加入的质粒要去除内毒素,plasmid:lipo约为1:0.5-1:5。实际上采用说明书的推荐量就很好,1:2.5
4,需要强调,lipo2000对细胞的毒性偏大,在转染后需要及时更换培养液,也正是因为如此我们才更换了DeofectEU
5,用前自己好好看一遍说明书,最好做个预实验