胃酸的分泌及胃的消化功能对于人体具有重要的生理意义。70年代的研究首次在牛蛙胃粘膜上分离出一类能被K+专一激活而不被乌本苷抑制的ATPase,即H+、K+-ATPase。随后的研究证明了该酶在胃酸分泌中的作用,为胃酸分泌的机理提供了分子学基础。H+、K+-ATPase定位于胃粘膜壁细胞上,通过自身的磷酸化与去磷酸化完成H+/K+电中性跨膜离子转运,从而实现胃酸的分泌功能。
ATP酶的活力可以通过测定无机磷的量来判断。无机磷的测定结果可以反映ATP酶的活性水平。
H+K+-ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的ATP酶。
1、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。
2、再现性好:变异系数CV=1.7%。
3、回收试验: X =103.3%。
4、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
5、测试面广:可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等,效果均佳。
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为660nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃和45℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
红细胞:按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理方法请参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
1、酶促反应:按说明操作加入样本100l和混合试剂,37℃准确反应10分钟
2、加R7,3500转/分,离心10分钟,取上清
3、定磷:取上清液加入定磷剂,45℃水浴5分钟
4、660nm波长,1cm光径,比色
[1]刘振中 三甲基氯化锡中毒氯化钾的治疗作用研究及对肾氢钾ATP酶的表达影响。山西医科大学硕士学位论文。