Western及IP细胞裂解液是一种非变性条件下裂解细胞的溶液,可用于PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等实验。该裂解液含有多种抑制剂,如20mM Tris (pH 7.5)、150mM NaCl、1% Triton X-100、sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3VO4和leupeptin等,可有效抑制蛋白降解并维持蛋白间相互作用。
对于培养细胞样品:
1. 充分混匀Western及IP细胞裂解液,加入PMSF使其浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞,去除培养液后加入适量的裂解液,用枪吹打使裂解液和细胞充分接触。
3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞后加入裂解液,用手指轻弹使细胞裂解充分。
4. 充分裂解后,离心取上清,可进行后续实验。
对于组织样品:
1. 将组织剪切成细小碎片。
2. 充分混匀Western及IP细胞裂解液,加入PMSF使其浓度为1mM。
3. 按比例加入裂解液,用玻璃匀浆器匀浆使组织裂解充分。
4. 充分裂解后,离心取上清,可进行后续实验。
参考文献:
[1] Zhang X, Chen S, Wang Y. Honokiol up-regulates prostacyclin synthease protein expression and inhibits endothelial cell apoptosis. Eur J Pharmacol. 2007 Jan 5;554(1):1-7.
[2]. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA interference technique on the proliferation and apoptosis of human colorectal cancer cells LOVO. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research. 2007;Vol 11(16):3104-3107.
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