一、TAK-659 hydrochloride的生物活性：
1）体外活性
TAK-659在广泛的激酶组中对SYK和FLT-3的选择性超过其他290种蛋白激酶。它能抑制原代CLL细胞和伯基特氏淋巴瘤细胞中的Syk活化和BCR信号传导。在原代CLL细胞中，TAK-659处理导致BCR刺激后SykTyr525，Btk，NFκB，ERK1 / 2和STAT3的磷酸化的剂量依赖性降低。TAK-659的抑制作用诱导CLL细胞凋亡并消除BCR和共培养衍生的存活信号。此外，TAK-659还能抑制原代CLL细胞中BMSC，CXCL12和CXCL13的趋化性，并消除微环境诱导的化学抗性。TAK-659对来自CLL患者的原代T细胞中TCR信号传导和T细胞活化的分子特征没有抑制作用。在细胞增殖测定中，TAK-659对SYK依赖性细胞系（OCI-LY10）显示抑制作用，而对粘附的原发性或实体肿瘤细胞系没有细胞毒性。在细胞活力测定中，TAK-659对FLT3-ITD依赖性细胞系MV4-11和MOLM-13敏感，而对WT FLT3 RS4-11（ALL细胞系）和RA1（Burkitt淋巴瘤细胞系）不敏感。在培养的人肿瘤细胞中，TAK-659有效抑制造血细胞系的生长。
2）体内活性
在FLT3依赖性MV4-11异种移植模型中，TAK-659在给药20天后显示肿瘤消退。初步血浆和尿液PK数据显示TAK-659被快速吸收，稳态暴露的变异性中等（DN-AUCtau为40-50％CV），平均峰值/谷值比为3.2-4.2，并且在15天QD给药后平均累积2.1-2.6倍。TAK-659在体内阻断抗IgD刺激小鼠外周B细胞中的CD86表达。
二、TAK-659 hydrochloride的实验方法：
1）细胞实验
使用可溶性四唑盐MTS测定细胞活力的抑制。将细胞接种在96孔组织培养板中，并在37℃/ 5％CO 2下孵育24小时，然后加入化合物或DMSO载体。在与化合物一起温育72或96小时后，通过使用Thermomax酶标仪测量孔的OD490nm来确定代谢活性细胞的MTS转化。
2）动物实验
动物模型：无胸腺裸鼠配方：0.5％羧甲基纤维素（CMC）剂量：10,30,60 mg / kg QD给药：口服强饲法。
综上所述：
TAK-659是一种有效的选择性脾酪氨酸激酶（SYK）抑制剂，它对大多数其他激酶具有选择性，但对SYK和FLT3均有效。它的靶点活性为FLT3,4.6nM；JAK3,114nM；Syk,3.2nM；VEGFR2,135nM；ZAP70,75nM。
参考文献：
[1]. Lam B, et al. Discovery of TAK-659 an orally available investigational inhibitor of Spleen Tyrosine Kinase (SYK). Bioorg Med Chem Lett. 2016 Dec 15;26(24):5947-5950.
[2]. Purroy N, et al. Inhibition of BCR signaling using the Syk inhibitor TAK-659 prevents stroma-mediated signaling in chronic lymphocytic leukemia cells. Oncotarget. 2017 Jan 3;8(1):742-756.
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