异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,即IPTG,是一种安慰性诱导物,常与生色底物X-gal一起用于蓝白斑筛选。IPTG能够诱导lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,从而实现基因内互补(α互补)。与乳糖不同,IPTG不会被细菌代谢,因此具有持续稳定的诱导效果。
乳糖操纵子(元)是E.coli中的一个重要元件,包含Z、Y和A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶。操纵子(元)的调控区由O序列、P序列和CAP结合位点组成,I基因编码的阻遏蛋白与O序列结合,使操纵子(元)处于关闭状态。当乳糖存在时,乳糖经过催化转变为半乳糖,半乳糖与阻遏蛋白结合,导致阻遏蛋白与O序列解离,从而实现转录。
IPTG是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而稳定存在。它能够结合阻遏蛋白,使其构象发生变化,从而解离与O序列的结合,实现lac操纵子的诱导。与乳糖相比,IPTG具有诱导效率高、持续稳定的优点,因此在实验室中被广泛应用。
1. IPTG是一种安慰诱导物,能够诱导酶的合成而不被分解。与乳糖相比,IPTG避免了复杂的动力学问题。
2. IPTG不被菌体代谢,能够产生持续长久的诱导效果。只需很少量的IPTG即可达到理想的诱导效果。
3. IPTG能够在缺乏lacY基因的情况下被抄送。
4. IPTG虽然不被β-半乳糖苷酶识别,但它是lac基因簇中非常有效的诱导物。