硒可以形成不同类型的化合物，包括硒化物（Se（Ⅱ））、亚硒酸盐（Se（Ⅳ））和硒酸盐（Se（Ⅵ））等。其中，四价硒化合物是最稳定的。二氧化硒在水中溶解后变为亚硒酸，而在强氧化剂的作用下，Se（Ⅳ）可以被氧化为Se（Ⅵ）。相反地，一般的还原剂可以将Se（Ⅵ）还原为Se（Ⅳ）甚至元素态。光度测定是测定硒含量最常用的方法之一，其中最常用的方法是3，3'－二氨基联苯胺法和2，3－二氨基萘法。这些方法具有高灵敏度和良好的选择性。
3，3'－二氨基联苯胺法是一种在酸性介质中使用的方法。在这种方法中，Se（Ⅳ）与3，3'－二氨基联苯胺反应形成黄色的难溶于水的螯合物。这是一种非常灵敏的比色测定硒的方法之一。该方法可以用以下反应式表示：
反应产物在甲苯溶液中有两个吸收峰，分别位于340和420毫微米处。通常选择在420毫微米处来比色测定硒，其吸收光谱曲线如图Ⅷ－30所示。在420毫微米处，其摩尔吸收系数等于1．02×104。该方法可以用于测定各种金属及其合金、硅酸盐、土壤、植物与生物材料、有机物、水、空气及硫酸等中的硒含量。
进行硒的光度测定需要以下试剂和溶液：
1．3，3'－二氨基联苯胺 0．5％溶液。使用前用煮沸并已冷却的水临时配制。
2．硒标准溶液 含硒1毫克／毫升。溶解1．4050克二氧化硒（用升华法提纯，保存于P2O5器皿中）于适量水中，在容量瓶中加水稀释至1升。根据需要进行稀释以制作标准曲线。
3．蚁酸 10％溶液。
4．甲苯。
进行硒的光度测定的步骤如下：
1. 取含硒量不大于200微克的分析试液近30毫升，加2毫升甲酸，5毫升二氨基联苯胺溶液并使溶液酸度达到pH2．0－2．5。溶液放置30分钟，然后用氨水中和至pH6－7，以甲苯萃取1至2次，每次萃取1分钟，尽量避免形成乳浊液。将萃取液移入50毫升容量瓶中，用甲苯稀至刻度，摇匀后在420毫微米处（或用蓝色滤光片）进行光度测定。以水或空白溶液（在少量硒时）作对照。
在进行硒的光度测定时需要注意以下事项：
倘若有Al、Bi、Cu、Ni等金属离子存在，应加入EDTA进行掩蔽。有Fe（Ⅲ）存在时，应加入0．05－0．5克氟化钠进行掩蔽，其量视铁的多少而定。
另外，2，3－二氨基萘法也是一种常用的测定硒的方法。在中性或酸性溶液中，2，3－二氨基萘与Se（Ⅳ）反应形成有色化合物。该试剂在水溶液中相当稳定，几乎不被空气中的氧和其他氧化剂氧化。在EDTA、氟化物和草酸盐存在下测定硒时，仅大量的铜和氧化剂会有干扰。该方法的适宜pH为1．5－2．5。
进行2，3－二氨基萘法测定硒时，需要以下试剂和溶液：
1．2，3－二氨基萘 0．1％的0．1N 盐酸溶液。
2．EDTA 0．1M 水溶液。
3．NaF 0．1M水溶液。
4．草酸钠 0．1M水溶液。
进行2，3－二氨基萘法测定硒的步骤如下：
1. 取含Se（Ⅳ）的酸性或中性试液，加入5毫升EDTA、1毫升NaF和1毫升草酸钠溶液，并调节溶液至pH2．0。再加入5毫升2，3－二氨基萘，放置2小时至显色完全。将混合液移至100毫升分液漏斗中，用少量水洗涤。准确加入5毫升甲苯，萃取1分钟，然后在377毫微米处测量有机相的吸光度。
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