如何构建启动子和增强子报告基因载体? ¹

启动子和增强子报告基因载体的构建方法是利用PCR技术从基因组DNA中扩增出待构建基因的启动子和增强子序列，然后将其构建到报告基因的上游。这些构建的载体可以被转染到体外培养的细胞中，以分析启动子和增强子序列对基因表达的调控作用。

启动子和增强子报告基因载体的应用

1、通过构建人乳腺珠蛋白（hMAM）启动子和增强子调控的报告基因表达载体，可以研究hMAM启动子和增强子序列在乳腺癌细胞中的特异性调控作用。研究方法是利用PCR技术从基因组DNA中扩增出hMAM启动子和增强子序列，然后构建到PGL3报告基因的上游。这些载体被转染到体外培养的乳腺癌细胞MDA-MB-415、T47D和胃癌细胞7901中，以分析启动子和增强子序列对乳腺癌细胞的基因表达调控作用。实验结果表明成功构建了hMAM启动子和增强子调控的表达载体，并且这些启动子和增强子能够调控报告基因的表达。因此，hMAM启动子和增强子在MDA-MB-415乳腺癌细胞中具有调控基因表达的作用。

2、利用前列腺特异性抗原（PSA）组织特异性表达的特点，可以克隆出其上游增强子（PSAE）和启动子（PSAP）片段，并对其表达效率和组织特异性表达进行初步研究。研究方法是从前列腺癌组织提取基因组DNA，并利用PCR方法分别扩增PSA增强子和启动子序列。然后，利用报告基因pEGFP一1，构建含有不同调控序列的表达载体。最后，通过脂质体介导基因转染不同细胞，并观察绿色荧光蛋白（GFP）的表达情况。

主要参考文献

[1] 吴金香，于建刚，林德馨，庄祥龙。 hMAM启动子／增强子调控表达载体构建和调控作用。《医学分子生物学杂志》2012年第1期 56-61,共6页。

[2]邬喻，曾甫清，汪良，夏伟，王艳波。前列腺特异性抗原启动子增强子调控重组质粒的构建及鉴定。《中华肿瘤防治杂志》 2007年第21期 1601-1604,共4页。