ANTI-HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体是一种多克隆抗体,能够特异性结合HISTONE H3(PHOSPHO T3),广泛应用于多种免疫学实验,包括Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。
检测原理是利用双抗体夹心法测定标本中HISTONE H3(PHOSPHO T3)的水平。首先,在微孔板上包被纯化的HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体,形成固相抗体。然后,依次加入HISTONE H3(PHOSPHO T3)和HRP标记的HISTONE H3(PHOSPHO T3)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色反应。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中的HISTONE H3(PHOSPHO T3)浓度呈正相关。最后,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),根据标准曲线计算样品中HISTONE H3(PHOSPHO T3)的浓度。
组蛋白赖氨酸甲基化是由赖氨酸甲基转移酶(KMT)介导的,而赖氨酸脱甲基酶(KDM)则会去除甲基化。组蛋白H3的甲基化赖氨酸残基包括Lys4、9、27、36和79。每个赖氨酸残基可以单甲基化、二甲基化或三甲基化,并且每种甲基化状态似乎具有不同的功能。
甲基化不会影响组蛋白的电荷,但会调节读取蛋白与其相关蛋白复合物的结合。例如,组蛋白H3 Lys27的三甲基化(H3K27me3)会为多梳阻遏蛋白复合物2(PRC2)提供结合位点,从而形成对转录具有阻遏性的致密染色质。
另外,H3K4me3是一种结合多种转录激活读取蛋白的标记物。甲基化赖氨酸残基为含有染色质域、MBT结构域、WD40结构域和PHD指结构的读取蛋白提供结合域。
该研究旨在探索表观遗传模式对孤雌胚胎发育能力的影响,并研究小鼠MⅡ期卵母细胞孤雌激活胚胎的H3K27三甲基化和乙酰化模式与体内胚胎的差异。通过修正异常的表观遗传模式,希望提高孤雌激活胚胎植入前各时期的发育能力和后期的着床能力。
研究采用超排技术获得小白鼠的胚胎,并通过SrCl2激活小鼠MⅡ期卵母细胞获得孤雌激活胚胎。利用间接免疫荧光的方法,在激光扫描共聚焦显微镜下检测各类胚胎的组蛋白H3K27三甲基化和乙酰化模式,并与体内正常组胚胎进行比较。
此外,研究还尝试使用曲古抑菌素A(Trichostatin,TSA)和5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-AzaC)两种抑制剂对孤雌激活胚胎进行处理,然后检测孤雌激活胚胎的组蛋白H3K27三甲基化和乙酰化模式的变化。
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