中文名称: 肽基脯氨酰异构酶底物：WFY(p)SPR-7-氨基-4-甲基香豆素
英文名: H-Trp-Phe-Tyr-Ser(PO?H?)-Pro-Arg-AMC
CAS号: 1926163-51-0
单字母: H2N-WFY-pSer-PR-AMC
三字母: H2N-Trp-Phe-Tyr-Ser(PO3H2)-Pro-Arg-AMC
氨基酸个数: 6
磷酸肽在生命过程中扮演着重要的角色，磷酸化通常发生在多肽的Tyr、Ser和Thr上。目前，磷酸肽的合成常采用磷酸化氨基酸，而常用的磷酸化氨基酸是单苄基磷酸化氨基酸。然而，采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接磷酸化氨基酸存在一些缺点，特别是在合成多磷酸化多肽或氨基酸较长的多肽时，连接效率低，产物纯度较低。针对这些问题，后磷酸化方法被提出，其合成过程是在多肽合成完成后，选择性去除要标记的氨基酸的侧链保护基，对于Tyr和Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt）在1% TFA/DCM条件下去除保护基。后磷酸化方法采用双苄基亚磷酰胺和四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基上，然后在过氧酸下氧化生成磷酰基，完成反应。
目前，多肽的磷酸化修饰方法主要有两种：
1）将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中：即事先将需要磷酸化的氨基酸（Thr、Ser或Tyr）磷酸化并适当保护，然后按照正常SPPS合成流程将磷酸化单体缩合到多肽的指定位点。这种方法操作简便，已经成为多肽单位点磷酸化修饰的主要方法。
2）多肽序列在树脂上合成完后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化：采用将磷酸化单体缩合到多肽中的方法进行磷酸化修饰时，由于磷酸化的氨基酸侧链修饰较大，产生位阻导致难以与肽链缩合，并且之后的氨基酸引入也会比较困难。尤其在含有多个磷酸化位点修饰时，合成将变得异常困难，并且最终产物成分复杂，难以分离，产率极低。因此，当肽链中多个位点需要磷酸化时，可以考虑在多肽序列在树脂上合成完成后，再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化。其合成过程主要是在多肽合成结束后，选择性去除要标记氨基酸的侧链保护基，对于Tyr和Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应。侧链保护基在1% TFA/DCM条件下可以定量去除。采用这种方法时，可以采用双苄基亚磷酰胺和四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体，连接到羟基上，然后在过氧酸条件下氧化生成磷酰基，完成反应。
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