那样做不能提高转染效率,并且会使转染后筛选更麻烦,激活后再转染脂质体的毒性会更明显。转染失败的原因a:转染时间过长,脂质体的后续毒性很大,b:加G418过早;c:G418梯度设置不好;d:未转进去。我们实验室用24孔板做，每孔2ulRFECT，设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度做2个复孔，建议在转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间。最好能设一个脂质体的梯度,找到最佳脂质体用量；延迟G418的加入时间,每一个G418浓度间隔时间延长
