如何用脂质体法转染结肠癌细胞系? ¹

背景介绍^[1]

人结肠癌转基因细胞是一种通过脂质体法将特定基因转染到结肠癌细胞系中的细胞。这些细胞系中含有稳定整合的目的基因，并具有表达调控等功能。这些细胞系来源于结肠癌组织，转染后呈上皮细胞样态。

培养方法^[1]

细胞传代：

1）当细胞生长至培养瓶表面的80%时，将25cm²培养瓶中的培养液倒掉，并用PBS洗涤细胞一次。

2）向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。然后将悬液转移到15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）弃上清，将细胞沉淀重悬于12ml完全培养基中，按1:2的比例进行分瓶传代，然后放入37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

4）待细胞完全附着后，观察培养结果，然后进行换液培养或传代。

细胞冻存：

1）当细胞生长至培养瓶表面的80%时，将25cm²培养瓶中的培养液倒掉，并用PBS洗涤细胞一次。

2）向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。然后将悬液转移到15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）将细胞重悬于适量的冻存液（FBS：DMSO=9：1）中，并放置于冻存管中。

4）先将细胞冻存管放置于-20℃冰箱中1.5小时，然后转移到-80℃冰箱中过夜，24小时后转入液氮中进行长期保存。也可以使用程序降温盒直接放入-80℃冰箱中。

细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

2）将冻存管中的细胞转移到含有5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。

3）弃上清，将细胞沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种到25cm²培养瓶中，在37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。

4）第二天，继续使用新鲜的完全培养基进行培养。

主要参考文献

[1] Hyun Kyung Lim, Woori Bae, Hyi-Seung Lee, Joohee Jung. Anticancer Activity of Marine Sponge Hyrtios Sp. Extract in Human Colorectal Carcinoma RKO Cells With Different p53 Status. Biomed Res Int.