如何使用TBX培养基进行大肠杆菌的快速检测? ¹

背景^[1-3]

TBX培养基是一种改良的培养基，专门用于快速检测食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中的大肠杆菌。该培养基能够在24小时内快速、准确地检测大肠杆菌。在培养过程中，大肠杆菌会呈现蓝绿色，大肠菌群呈无色，其他菌种呈黄色或无色，而革兰氏阳性菌则被抑制生长。

用法

将33.6克TBX培养基加入1000毫升蒸馏水中，加热溶解并不停搅拌，煮沸不超过1分钟。将溶解好的样品液分装到三角瓶中，然后在121℃高压条件下灭菌15分钟。取1毫升制备好的样品液加入直径为9厘米的无菌平皿中央，倒入约15毫升冷却至45-50℃的培养基，混匀后凝固。将培养皿倒置放置在36±1℃的培养箱中培养18～24小时。

或者，将样品液冷却至45-50℃后倒入无菌平皿中，待琼脂完全凝固后，将培养皿倒置放置在37℃的培养箱中1-2小时，然后加入适当稀释度的样品液1毫升，涂布于培养基上，再在36±1℃的条件下培养18～24小时。

操作步骤

1. 根据国家标准、SN标准、FDA标准或其他方法制备样品液。

2. 取1毫升样品液加入冷却至45-50℃的显色培养基中混匀或涂布于平板上。

3. 在36±1℃的条件下培养18～24小时，选择有30～200个菌落的平板，计数典型的大肠杆菌菌落。典型的大肠杆菌菌落呈蓝绿色，其他细菌菌落呈无色或黄色。

总大肠杆菌数目等于蓝绿色菌落的数目。

4. 对可疑的大肠杆菌菌落进行划线接种到营养琼脂平板上，在36±1℃的条件下培养12-16小时。

应用^[4][5]

如何分离鉴定鸡源大肠杆菌并检测四环素类耐药基因？

大肠杆菌病在养殖业中造成了重大损失，鸡源大肠杆菌病主要表现为大肠杆菌性败血症、肝周炎、心包炎和卵黄性腹膜炎等症状。大肠杆菌还可以通过污染鸡蛋、蛋制品以及耐药性的传播对人类健康构成威胁。因此，开展鸡源大肠杆菌相关研究具有重要的经济学和公共卫生学意义。

本研究以陕西部分规模化养殖场的158株鸡源大肠杆菌为研究对象，研究了其对四环素类药物的耐药性以及相关耐药基因的携带情况，并尝试探讨耐药性与耐药基因之间的相关性，为进一步阐明大肠杆菌耐药性产生的机制以及临床疾病的防控提供理论支持。

1. 采用无菌法从陕西部分规模化养鸡场的病、死鸡肝脏样本中分离鉴定大肠杆菌。将样本分别接种到麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂上，挑选典型的单菌落进行纯化培养，并进行生化鉴定和血清型鉴定。结果显示，从450份肝脏样本中共分离鉴定出158株大肠杆菌，其中优势血清型为O78和O38。

2. 参照CLSI（临床和实验室标准协会）推荐的K-B药敏纸片法对158株鸡源大肠杆菌进行了四种四环素类药物的敏感性试验。结果显示，鸡源致病性大肠杆菌对四环素、氯四环素、氧四环素和多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%和50.6%。在158株大肠杆菌中，多重耐药菌株的比例高达78.5%。

参考文献

[1] Diversity of antimicrobial resistance genes and class-1-integrons in phylogenetically related porcine and human Escherichia coli[J]. Veterinary Microbiology. 2012(3-4).

[2] Distribution and transferability of tetracycline resistance determinants in Escherichia coli isolated from meat and meat products[J]. Hyon-Ji Koo, Gun-Jo Woo. International Journal of Food Microbiology. 2011(2).

[3] Characterization of antimicrobial resistance and molecular determinants of beta-lactamase in Escherichia coli isolated from chickens in China during 1970-2007[J]. Lin Li, Zhi-Gang Jiang, Li-Ning Xia, Jian-Zhong Shen, Lei Dai, Yang Wang, Si-Yang Huang, Cong-Ming Wu. Veterinary Microbiology. 2010(3).

[4] Escherichia coli of poultry food origin as reservoir of sulphonamide resistance genes and integrons[J]. Leila Soufi, Yolanda Sáenz, Laura Vinué, Mohamed Salah Abbassi, Elena Ruiz, Myriam Zarazaga, Assia Ben Hassen, Salah Hammami, Carmen Torres. International Journal of Food Microbiology. 2010(3).

[5] 牛建宁. 鸡源大肠杆菌的分离鉴定及四环素类耐药基因检测研究[D]. 西北农林科技大学, 2014.