M199培养基是一种非常适用于非转化细胞培养的培养基。它在培养小鼠胰腺上皮细胞和大鼠晶状体组织细胞等细胞时,通常能够取得良好的实验效果。除了细胞的体外培养,M199培养基还可以在病毒学研究和疫苗生产中使用。与其他基础培养基相比,M199培养基含有独特的成分,如腺嘌呤、腺苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶和其他维生素。该培养基不含蛋白质、脂类或生长因子,因此通常需要添加10%胎牛血清(FBS)。此外,M199使用碳酸氢钠缓冲系统(2.2 g/L),因此需要5%-10%的二氧化碳环境来维持生理pH值。M199可以与EBSS一起用于二氧化碳培养箱,或与HBSS一起用于不含二氧化碳的培养箱。
一项研究公开了一种人脐静脉内皮原代分离培养方法。该方法首先采集术后脐带,然后使用胶原酶分离提取脐静脉内皮细胞制成单细胞悬液,通过基于M199培养基的完全培养基将P0代细胞培养至P2代细胞。随后,使用胰蛋白酶对P2代细胞进行消化,并在基于M199培养基的完全培养基中接种于T75培养瓶中。当细胞融合度达到80%~90%时,得到扩增培养后的人脐静脉内皮细胞P3代细胞。这项研究的创新之处在于延长了脐带的储存时间至6小时,同时保证了细胞活力。
另一项研究公开了一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用。该方法首先采集外周血,分离出血浆和外周血单个核细胞。然后,使用含有血浆的M199培养基对外周血单个核细胞进行重悬,并加入EGF因子进行培养3-5天。接下来,去除未贴壁的悬浮细胞,并继续使用添加了血浆和EGF因子的M199培养基进行培养。当细胞达到80%~90%融合时,消化细胞,获得培养后的PB-MSC。这项研究的创新之处在于使用不同于传统方式的培养基有效培养从外周血分离出的外周血单个核细胞,避免了动员剂的使用,并保证了培养后的PB-MSC数量,同时提供了PB-MSC在抗皮肤衰老中的应用。
[1] M199 培养基产品描述
[2] CN201910459283.9 一种人脐静脉内皮原代分离培养方法
[3] CN201410690907.5一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用