考马斯亮蓝是一种用于染色的三苯甲烷衍生物染料,包括G-250和R-250两种类型。最初,考马斯亮蓝主要用于纺织行业,但现在它在生物化学中被广泛应用于蛋白质染色。
考马斯亮蓝G-250比考马斯亮蓝R-250多两个甲基。它是帝国化学工业下的一个注册商标。
1964年,Fazekas de St.Groth的团队首次使用考马斯亮蓝R-250观察蛋白质。他们在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离,然后将薄膜浸泡在染料溶液中,使蛋白质条带固定。
1965年,Meyer和Lambert使用考马斯亮蓝R-250对聚丙烯酰胺凝胶分离的蛋白质样品进行染色。他们将凝胶浸泡在含有甲醇乙酸和水的溶液中,然后对凝胶进行脱色,以使蛋白质条带可见。
1967年,首次报道了使用考马斯亮蓝G染色聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质条带的方法。染料溶解在含有甲醇的乙酸溶液中。后来发现,使用溶解在不含甲醇的三氯乙酸考马斯亮蓝G胶体,可以染色蛋白质条带而不染色聚丙烯酰胺。现代方法通常是将考马斯亮蓝G溶解在含有磷酸、乙醇(或甲醇)和硫酸铵(或硫酸铝)的溶液中。
布拉德福蛋白质定量法利用考马斯亮蓝G-250的光谱性质来检测溶液中的蛋白质含量。蛋白质样品加入到染料的磷酸和乙醇溶液中,染料与蛋白质结合后形成蓝色。通过测定溶液在595nm波长处的吸光度来确定蛋白质含量。这种方法非常灵敏,即使只有5μg的蛋白质也足以使染料变色。然而,不同类型的蛋白质对染料的吸光度变化程度不同。
考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后,会使蛋白质带负电荷。这个特性可以用于分离蛋白质或蛋白质复合物,通过非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳(Blue Native PAGE电泳)。复合物的迁移能力取决于蛋白质复合物的分子质量和结合到蛋白质上的染料量。
考马斯亮蓝染色也可以用于western印迹分析中的一步,作为对照。
2009年,考马斯亮蓝G在实验中被用于治疗实验室大鼠的脊髓损伤。它通过减少个体肿胀反应来发挥作用,肿胀反应会导致损伤区域的神经元受到代谢压力而死亡。该方法在大鼠上测试有效。研究结果表明,与未处理的大鼠相比,经过染料处理的大鼠在运动能力和运动测试中表现更好。目前,该治疗方法在人类身上的相关测试仍在进行中。最近的实验表明,在损伤后15分钟施予染料治疗是有效的。然而,在现实生活中,病人需要一定时间才能到达急救室,因此该治疗方法在受伤后两小时后仍可能有效。唯一报道的副作用是大鼠会短暂变蓝。