人Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)ELISA试剂盒是一种用于测定标本中人Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)水平的双抗体夹心法。该试剂盒利用纯化的人Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)抗体包被微孔板，形成固相抗体。然后，将Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)加入微孔中，并与HRP标记的Γ-GTP抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，最终转化成黄色。颜色的深浅与样品中的Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)呈正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，可以计算样品中人Y一谷氨酞转肤酶(Γ-GTP)的浓度。
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
3. 样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
利用Bacillus subtilis NX-2菌株的γ-谷氨酰转肽酶为催化剂，以L-谷氨酰胺作为γ-谷氨酰基供体，S-苄基-半胱氨酰甘氨酸作为γ-谷氨酰基受体，进行酶促转肽反应合成S-苄基-谷胱甘肽。该方法简化了反应流程，提高了反应收率，省去了化学合成法中复杂的保护和脱保护处理工序。
首先对S-苄基-半胱氨酰甘氨酸的合成工艺条件进行了优化，通过氨基保护、与甘氨酸甲酯的接肽以及氨基的脱保护，得到了S-苄基-半胱氨酰甘氨酸。研究结果表明，三步合成反应的反应转化率分别可以达到84.2%、88.9%和91%。
然后，对本实验室所保藏的Bacillus subtilis NX-2菌株进行发酵产酶研究，对获得的γ-谷氨酰转肽酶进行初步纯化。此后，对γ-谷氨酰转肽酶粗酶性质做了初步研究，考察了该粗酶的pH稳定性和最适pH、温度稳定性和最适温度以及金属离子对γ-谷氨酰转肽酶活性的影响。研究结果表明，该酶在pH7.0～10.0稳定性最好，最适催化反应pH值为8.0；在低于40℃的温度下，该酶有着较好的稳定性，最适催化反应温度为40℃；K+、Na+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cu2+的存在对该酶的活性不产生明显的抑制作用，而Fe2+、Fe3+、Hg2+则对该酶表现出明显的抑制作用。
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