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关于FISH的一些疑问？

我方向是环境工程偏微生物(厌氧氨氧化)，需要观察反应器内活的厌氧氨氧化细菌随时间数量的变化。看文献的描述，测定的方法是测MLVSS结合live/dead实验以及FISH实验，我的问题是:
1）FISH实验中，能够与探针原位杂交的细菌只是活的嘛，还是死的活的都能与探针杂交?原理是为什么
2）FISH实验中为何需要用多聚甲醛等物质对细菌进行固定这一步骤？固定是指固定细菌的移动还是形状还是其它？不固定后果是什么？
望大神解答感激不尽！

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共1个回答

沙哑情话随笔，化工研发 2021-03-16回答

先回答（2），FISH的固定步骤主要是为了稳定大分子和细胞骨架结构，避免杂交的过程中细胞裂解。参考如下https://www.arb-silva.de/fish-pr ... =General%20overview,of%20the%20cells%20during%20hybridization.

这个过程基本上对细胞会造成很大影响，固定完细胞也差不多死了。

对于你提到的（1），我不清楚你指的是想只针对采样中的活细胞进行检测呢？还是说需要在检测中操持细胞活性？

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