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反应完后选择哪种方法除去FITC?

我想用FITC标记两种小肽A和B,A分子量:约3785Da,B分子量:约3108Da,发现两条多肽链中的精氨酸、赖氨酸个数分别是6个和4个,我想反应时让FITC过量一些,使游离的氨基都带上FITC,这样A和B的分子量可能就变成5900Da(加上第一个氨基酸上的氨基,共7个游离的氨基)左右和4700Da左右。我的问题主要有以下几方面:1:反应完后选择哪种方法除去FITC?过凝胶柱?选择哪种洗脱液?FITC会不会附着在柱子上洗脱不下来?透析?这种方法样品损失大不大?样品量本来就不多,1mg左右。超滤?用3000Da的超滤管会损失多少样品?2:多肽被标记上FITC后活性会不会减弱或丧失?担心这个问题!求好心人帮忙解答一下吧。谢谢啦!


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共1个回答
其实我刚好也正在做这个实验,只是我标记的是蛋白,用的是sigma的F-7250.上面也是说要用G50做纯化,我们一开始也是这么做的,结果就是蛋白浓度变低。后来,我们直接用透析袋,感觉效果也差不多。后面一个问题我感觉应该不会丧失,至少我的没丧失活性,他的原理只是在碱性AA的R基上连一个FITC分子。
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