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如何确定抗体包被在了酶标板上?

目的:想要制备双抗体夹心ELISA的酶标板

方法:PH9.6碳酸盐缓冲液稀释抗体,约10ug/ml,4度过夜

疑惑:1、怎么样才能确定抗体包被在了酶标板上? 2、怎么设置组别?

         

空白组:不用抗体包被,只有:抗体稀释液+封闭+洗涤液+酶标抗体+显色液+终止液

阴性组:抗体包被,有:抗体+抗体稀释液+PBS+封闭+洗涤液+酶标抗体+显色液+终止液

阳性组:抗体包被,有:抗体+抗体稀释液+目的蛋白+PBS+封闭+酶标抗体+洗涤液+显色液+终止液

我理解着,空白组排除了试剂颜色的干扰,与阴性组相比存在较大差异是不是就说明了抗体包被上去了?

还有一种理解方式就是:包被了抗体(自制鼠源性的)+抗属的酶标抗体检测——吸光值达到什么样的程度可以说明包被上去了?与板孔的吸光值吗?

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共2个回答
做一下ELISA看有没有显色    
精力不用放在coating这步吧。
直接用costar 9018的板子,你所要做的只是用不同的浓度在不同温度下孵育不同时间。
比如10ug/ml或5ug/ml,4度或37度下,过夜或2小时之类的。
最重要的是你把阳性样品和阴性样品拿来检测,能用OD来作区分。这其中你抗体对最关键,其它的不会是大问题。    
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