不法药品生产者常将酸性红 73 用于红花的加工炮制，但酸性红 73具有一定的毒性，因此，本文将简述如何检测红花中的酸性红 73 染料。
背景：红花为菊科植物红花 Carthamustinctorius L.的干燥花。由于红花采收时间影响品质以及其易吸潮、发霉、变色等特点，近来在检验红花过程中，研究人员发现一些不法药品生产者利用酸性红 73 具有色泽鲜艳，着色稳定、价廉且可以经长时间烧煮、高温消毒而不分解褪色等耐高温特性，将其用于红花的加工炮制。酸性红 73 为食品禁用色素，其化学结构母核与苏丹红相同，为可疑致癌物质，而且对肾脏有毒性。
检测红花中的酸性红 73 染料：
1.TLC 鉴别和 HPLC 确证
杨荣艳等人 采用 TLC 对红花中非法染有酸性红 73进行定性鉴别； 采用 HPLC 确证建立的 TLC 可行。
（1）薄层色谱鉴别
取本品 1 g，加 70% 乙醇 20 mL，超声提取20 min，取上清液作为供试品溶液。另取酸性红 73对照试剂适量，分别加 70%乙醇溶解并制成每 1 mL含 60 μg 的溶液，作为对照试剂溶液。照 《中国药典》2010 年版一部薄层色谱法(附录Ⅵ B) 试验，吸取供试品溶液和对照试剂溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以乙酸乙酯 － 正丁醇 － 乙醇－ 氨水 － 水(1∶3∶3∶1∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不显相同颜色的斑点； 阴性对照不干扰测定。见下图。
（2）HPLC 测定酸性红 73(紫外检测器)
色谱条件：色谱柱: Agilent TC-C18 (250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相: 甲醇-0.025 mol·L－1 醋酸铵溶液，甲醇梯度洗脱条件: 20% ～45% (0 ～8 min)，45% ～80%(8 ～20 min)； 流速: 1.0 mL·min－1 ，检测波长: 508 nm，进样量: 10 μL，柱温: 35 ℃。
（3）结果
在 TLC 中，阳性样品可检出与酸性红 73 对照试剂位置和颜色一致的斑点；HPLC 中，也出现了与对照试剂保留时间一致的色谱峰，并且 DAD 检测器检验，在420 ～580 nm波长范围的紫外 － 可见吸收光谱相同。该方法前处理简便、快速、准确，可用于红花药材中非法染有酸性红73 的检查。
2.超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪检测
承晨等人采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪，对酸性红 73进行鉴定，同时联用二极管阵列检测器对其进行定量。
（1）液相条件
色谱柱:AgilentPoroshell 120 SB-C 18(4.6 × 100mm，2.7μm)； ZOＲBAX Eclipse plus C18 (2.1 ×100mm，3.5μm)。以甲醇为流动相 A，以 0.05mol·L－1 醋酸铵为流动相 B，按表 1 进行梯度洗脱；检测波长为 510nm；流速为 0.5mL·min－1；柱温 30℃；进样量为 2μL。
（2）质谱条件
电喷雾电离源(ESI)，毛细管电压 3.5kV，脱溶剂温度 350℃，脱溶剂气体流速 10L·min－1 。负离子检测，扫描方式采用全扫描一级质谱(MS)、全扫描二级质谱(MS/MS)，质量采集范围 100 ～800。MS/MS 碰撞能量 10。
该检测方法选择性高，分析时间短，干扰少，结果准确可靠，同时适用于定性与定量。
3.柠檬黄、酸性红 73、胭脂红染色及掺伪的检测
胡佳等人采用水试鉴别红花掺伪，薄层色谱法对红花染色进行初步判定，再利用高效液相二极管阵列检测器分析红花中的染色成分。结论薄层色谱法和高效液相二极管阵列检测器可以对红花中柠檬黄、酸性红 73 和胭脂红进行有效的鉴别。
参考文献：
[1]承晨.超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪检测红花中的酸性红73染料 [J].海峡药学, 2017, 29 (05): 58-60.
[2]胡佳,郭琳,何涛.27批红花柠檬黄、酸性红73、胭脂红染色及掺伪的检测 [J].光明中医, 2016, 31 (11): 1561-1563.
[3]杨荣艳,宋瑩,李本淳.红花药材中非法染有酸性红73的TLC鉴别和HPLC确证 [J].中国现代中药, 2014, 16 (08): 623-626.DOI:10.13313/j.issn.1673-4890.2014.08.005.
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