细胞克隆形成实验是一种重要的技术方法，用于评估细胞的增殖能力、侵袭性和对杀伤因素的敏感性。该实验包括平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。不同细胞具有不同的克隆形成率，正常细胞的克隆形成率较低，而肿瘤细胞的克隆形成率较高。此外，初代培养细胞的克隆形成率较低，而传代细胞系的克隆形成率较高。克隆形成率还受到接种密度的影响，因此在测定克隆形成率时，必须将细胞分散成单细胞悬液，并在细胞形成克隆时停止培养。克隆是由单个细胞在体外增殖形成的细胞群体，每个克隆包含50个以上的细胞，大小在0.3-1.0 mm之间。克隆形成率反映了细胞的独立生存能力，而各种理化因素可能会影响细胞的克隆形成能力。通过特定的实验方法，可以评估细胞的克隆形成能力，即细胞接种后存活并形成克隆的数量。克隆形成率是衡量细胞群体依赖性和增殖能力的重要指标。
A．平板克隆形成实验：适用于贴壁生长的细胞。
1. 取对数生长期的细胞，制备细胞悬液。
2. 将细胞悬液按梯度倍数稀释，分别接种到含有培养液的培养皿中，培养2-3周。
3. 定期观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，停止培养。
4. 弃去上清液，使用4%多聚甲醛固定细胞，然后使用GIMSA染色液染色10-30分钟。
5. 计算克隆形成率，即克隆数除以接种细胞数，再乘以100%。
6. 进行结果统计分析。
B．软琼脂克隆形成实验：适用于非锚着依赖性生长的细胞。
1. 制备细胞悬液，并按梯度倍数稀释。
2. 准备1.2%和0.7%的琼脂糖溶液。
3. 先将下层琼脂凝固，然后放入37℃的培养箱备用。
4. 加入细胞悬液，待上层琼脂凝固后，培养10-14天。
5. 计算克隆形成率，即克隆数除以接种细胞数，再乘以100%。
6. 进行结果统计分析。
1. 客户提供所需的细胞株、药品、药物处理方式和浓度。
2. 公司提供原始数据和分析结果，以及完整的实验报告。
3. 实验周期为20-40个工作日，具体根据细胞生长情况和实验内容而定。
[1] 李佩文；微流控芯片单细胞克隆形成实验用于乳腺癌干细胞靶向药物筛选。广州医科大学。
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