吖啶橙荧光染色试剂盒(Acridine Orange Detection Kit)是一种常用于细胞凋亡检测的试剂盒。它由AO Stain和AO Stain Buffer组成。染色后，通过荧光显微镜观察，吖啶橙可以透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光。而在凋亡细胞中，由于染色质固缩或断裂，形成凋亡小体。
吖啶橙可以使细胞染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒，而坏死细胞的黄荧光会减弱甚至消失。吖啶橙染色常与EB染色合用双染，EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可以区分出正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
吖啶橙荧光染色试剂盒是一种可以标记DNA和RNA的异染性荧光染料。它具有膜通透性，可以透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，吖啶橙常用于细胞内DNA和RNA的检测。吖啶橙与核酸的结合方式主要有插入性结合和静电吸引。插入性结合是指吖啶橙嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要发生在吖啶橙与DNA的结合上。静电吸引是指带正电荷的吖啶橙与单链核酸的磷酸根之间产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要发生在吖啶橙与RNA的结合上。吖啶橙与DNA结合时发出绿色荧光，与RNA结合时发出红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
吖啶橙荧光染色法（acridine orange fluorescent, AO-F）被应用于循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTCs）的筛选平台，并在肾癌患者的外周血CTCs筛查中得到应用，评估其在肾癌患者中的临床价值。
方法1：通过对肾癌组织原代细胞和肿瘤细胞株769-P进行AO-F染色，观察细胞形态和着色情况。分别制备死亡肿瘤细胞和活肿瘤细胞，然后进行AO-F染色，计算两组细胞中AO-F+细胞所占的比例，评估AO-F染料对肿瘤细胞的敏感性。
方法2：从健康体检者的静脉血中提取单个核细胞，通过逐级稀释的方法制备含有106个单个核细胞的细胞悬液。将不同数量的769-P细胞与106个单个核细胞混合，模拟肾癌患者外周血CTCs模型，然后进行AO-F染色，计算各组肿瘤细胞的回收率，验证该方法的敏感性和可重复性。
方法3：使用上述方法检测139例肾癌患者（112例早期患者和27例转移患者）、10例良性肾病患者的外周血中CTCs的表达水平。并分析10例健康志愿者的外周血样本，评估此方法的特异性。
方法4：分析CTCs表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、T分类、furhman分级、是否转移等临床病理参数之间的关系。
[1]Circulating tumor cells in prostate cancer:A potential surrogate marker of survival.Jérme Doyen,Catherine Alix-Panabières,Paul Hofman,Scott K.Parks,Emmanuel Chamorey,HervéNaman,Jean-Michel Hannoun-Lévi.Critical Reviews in Oncology/Hematology.2012
[2]Detection of circulating tumor cells and its clinical value for different stages and various subtypes of breast cancer.Li L,Liu Y,Zhang S,et al.Chinese Medical Journal.2014
[3]Long term survival following the detection of circulating tumour cells in head and neck squamous cell carcinoma.Stuart C Winter,Sally-Anne Stephenson,Selva K Subramaniam,Vinidh Paleri,Kien Ha,Conor Marnane,Suren Krishnan,Guy Rees.BMC Cancer.2009
[4]Acridine orange flow cytometric analysis of renal cell carcinoma.Clinicopathologic implications of RNA content.El-Naggar A K,Batsakis J G,Teague K,et al.American Journal of Pathology.1990
[5]刘敏.吖啶橙荧光染色法检测肾癌循环肿瘤细胞及其临床意义[D].天津医科大学,2015.
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