线粒体染色试剂盒的应用及使用方法？ ¹

线粒体染色试剂盒是一种能够标记活细胞中线粒体的试剂，使其带有绿色荧光。该试剂盒使用一种疏水性复合物作为染料，属于线粒体选择性染料。该染料能够轻松进入活细胞内，通过线粒体膜电位变化渗透进入线粒体，并在线粒体中富集。

线粒体染色试剂盒提供了蓝色、绿色、红色、橙色等不同荧光供选择，可以单独使用，也支持对细胞的多重荧光分析。这种高效的细胞标签为从空间和时间上研究细胞活动提供了一种有效的方法。

线粒体染色试剂盒的应用

用于基于线粒体途径探讨安寐汤抑制失眠大鼠皮质神经元兴奋机制研究

该研究使用3月龄SPF级SD大鼠进行实验，通过对氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射的方法制作失眠模型，并观察额叶皮质神经元线粒体形态功能的改变。通过超活染色和电镜观察线粒体的数目和超微结构变化，同时使用荧光显微镜检测线粒体膜电位改变和WST-1法测定线粒体ATP酶含量。

此外，还采用3、6、9、12月龄大鼠进行造模后观察线粒体的数目和超微结构变化，以及线粒体膜电位改变和线粒体ATP酶含量。

线粒体超活染色观察实验结束后，使用脊椎脱臼法处死大鼠，取出脑组织，分离出额叶皮质后，使用詹纳斯绿B（JGB）染色试剂盒进行染色，以判断线粒体功能的完整性。

使用方法

1. 准备线粒体染色液

1.1 将MitoView Green染料（Component A）室温避光放置5-10分钟预热。

1.2 取20µL预热好的MitoView Green染料（Component A），用10 mL活细胞染色缓冲液（Component B）进行稀释。

2. 细胞染色

2.1 对于贴壁细胞，在96孔板或培养皿内培养细胞，当细胞达到70-80%融合度后，添加等体积的染色工作液，在37°C、5%CO2条件下培养细胞30分钟-2小时。使用HHBS（含20mM Hepes的Hanks缓冲液）或自配Buffer（Hanks缓冲液与生长培养基按1:1混合）替换染色液，使用荧光显微镜观察。

2.2 对于悬浮细胞，在1000 rpm条件下离心细胞培养液5分钟，去除上清液，用预热好的细胞培养液重悬细胞，然后添加等体积的染色工作液，在37°C、5%CO2条件下培养细胞30分钟-2小时。使用HHBS或自配Buffer替换染色液，使用荧光显微镜观察。

参考文献

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