使用invitrogen的TRIzol提取生长在电纺支架上的细胞的RNA,严格按照说明书操作,但无论是有支架的这组,还是没有支架这组,都会出现
苯酚残留。
后来改用TRIzol结合过注法,依然出现苯酚残留。提取的很多孔苯酚读数过高,去除苯酚后的纠正曲线不可用。
除了苯酚污染的问题,使用TRIzol后,每次提取的RNA,A260/280普遍在1.3~1.8,a230/260普遍<0.6,纯度很差。
我也试过用过柱法,但是由于支架上的细胞使用过柱法提的量根本不够,所以只能使用TRIzol,因为trizol裂解细胞能力更强。我之前使用过柱法提取的没有支架的组,RNA质量都很好,但一TRIzol就开始出问题。
困扰了很久,求各位大神指点Trizol提取过程,哪些步骤可能会导致苯酚保留?
氯仿抽提后,我只吸取了最上层的400ul,绝对没有碰到下层的,所以我实在想不到还有哪部可能会导致本身残留。