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取大鼠脑组织同时做免疫组化和RT-PCR,我的老鼠数量一定要翻倍吗?

我准备取大鼠脑组织同时做免疫组化和RT-PCR,免疫组化打算用石蜡切片,需要灌流,而RT-PCR又需要用新鲜脑组织,这样势必要用两组大鼠分别做这两个实验,本来一组可能只需要80只左右,而为了再做RT-PCR,就要加到160只,这样工作量就增加一倍。所以,想请教你们,有没有可行的办法,比如取一只大鼠的脑组织,同时做免疫组化和RT-PCR?
要是不行,我每一个时间点做免疫组化和RT-PCR所需要的大鼠是否至少各取6只才具有统计学意义呢?能不能数量上尽可能再少一点呢?

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共2个回答
有一种方法可以用免疫组化的切片做rna,就是价格高些。同样的取材,一次都搞定
我不清楚你要取哪一部分脑组织来做这两个实验,是全脑吗?我们实验室一直都是做海马的。
我觉得这两个实验不矛盾,我的建议是:
1.大鼠麻醉取脑后,将大脑矢状位切为左右两个大脑半球
2.一个半球迅速分离你需要的脑组织,(其实做RT-PCR需要的组织量是非常少的,我们一般只要20mg),冷冻于液氮中,研磨后就可以提取总RNA了;3.另一半球放入固定液中,固定足够长的时间,然后酒精中梯度脱水,石蜡包埋等一系列步骤就可以了。(我们大鼠一般都是要灌注固定的,但你RT要新鲜的组织就只能取脑后再固定了,我建议至少固定6h以上)
注意:取了脑后一定要先处理你要RT的那一半脑组织,动作尽量迅速,不然对提取的总RNA质量影响很大的,我们
这两个实验我都做过,但是在不同的大鼠上做的,但我觉得两个实验同时做还是可行的。这两个实验的详细操作步骤我都有,你需要的话给我留言吧,我发给你
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