最近一直在做western blot，上星期终于曝出条带。我是用SANTA的单抗1：200（推荐比例）孵育2h，二抗1：2000孵育1h（RT）。ECL用的是PIERCE 的supersignal，发光液覆盖后5min内就出现很亮的荧绿色条带。目的蛋白和内参actin都出来条带，很清晰。
但是出现了一个问题，我的目的蛋白的分子量是32kd，但是曝光出来的条带位置大概在70kd附近。请教过一些老师和园子里有经验的人，换了新的蛋白上样缓冲液，延长了煮蛋白的时间。同样步骤，但是考马斯染色还是在70kd附近有浓的条带。因为今天 曝光失败，整个膜都出现了绿色荧光，所以不知道曝光条带怎么样。加过cell的膜有没有办法洗干净，重新做？
