聚合酶链式反应 (PCR) 是分子生物学领域功能强大的技术之一。影响引物和探针的稳定性的主要因素是储存温度、储存时间、是否被长时间暴光、储存的引物和探针的浓度以及储存溶液的组分。
长期保持引物和探针的稳定性的关键有四点:
1、低压冻干的引物在储存时间和温度方面具有更好的灵活性。引物一旦重新溶解,即应置于 -20°C 保存,且若保存时间超过一年则应对其进行监测,看它是否出现功能下降。
2、对于标记的引物和探针,则应采取措施避免标记物暴光 (例如使用不透明管及置于暗处保存),以延长它们的使用寿命。
3、引物浓度也可影响其稳定性。建议引物的储存浓度不低于10 μM;实际上,在大多数情况下,100 μM 的引物浓度操作更简单。引物和探针还应分装保存,以减少冻融次数,特别是标记的引物和探针。
4、最后,TE 缓冲液可形成比水更为稳定的环境。此外,含有 0.1 mM EDTA的 TE 缓冲液 (标准 TE 中含有 1 mM EDTA) 是一种理想的溶液,这是由于一些 PCR 反应对 EDTA 的灵敏度可能有一些残存。