布立尼布是一种针对VEGFR2的ATP竞争性抑制剂，其IC50值为25 nM。它还能适度抑制VEGFR-1和FGFR-1，对VEGFR2的选择性是对PDGFR-β的240倍。
一、布立尼布的生物活性详解：
1）体外活性
布立尼布能够抑制VEGFR1和FGFR-1，其IC50分别为0.38μM和0.148μM。布立尼布对PDGFRβ、EGFR、LCK、PKCα或JAK-3不敏感，其IC50均高于1900 nM。此外，布立尼布对VEGF刺激的HUVEC的增殖有抑制作用，其IC50为40 nM，而对FGF刺激的HUVEC的抑制作用为276 nM。布立尼布在肿瘤细胞系中表现出较低的活性[1]。布立尼布在低剂量（≤20μM）时增强FGF诱导的LX-2细胞增殖，而在较高剂量（≥30μM）时抑制LX-2细胞增殖。布立尼布对肝纤维化的抑制作用不是通过抑制TGF-β1诱导的星状细胞活化，而可能是通过抑制PDGF-BB诱导的星状细胞活化[3]。
2）体内活性
布立尼布在无胸腺小鼠的H3396异种移植物中显示出抗肿瘤活性。在口服剂量为60和90 mg/kg时，布立尼布完全抑制了肿瘤生长，TGI分别为85％和97％[1]。此外，布立尼布显著抑制了肝细胞癌（HCC）异种移植物中的肿瘤生长，这是由于VEGFR2的磷酸化降低。结果显示，与对照组相比，剂量为50mg/kg和100mg/kg的布立尼布分别减轻了06-0606异种移植小鼠的肿瘤重量55％和13％。布立尼布被认为是有效治疗HCC的药物[2]。布立尼布（50mg/kg，口服）还减轻了小鼠体内BDL诱导的肝纤维化和星状细胞活化。布立尼布抑制了假对照动物的生长因子和生长因子受体mRNA表达，但在胆管结扎动物中表现出不同的作用[3]。
二、布立尼布的实验方法：
1）动物实验
使用4-6周龄的雄性小鼠，每周处理3次，总共12次腹膜内（i.p.）注射150mL/kg TAA。在TAA治疗开始时，连续5天口服给药安慰剂或布立尼布（25或50mg/kg），周末休息。在注射开始后4周处死动物。
2）细胞实验
使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）在LX-2细胞中测量活力。在每孔2,000个细胞的96孔板中，将HSC在10％FBS补充的DMEM中孵育24小时，然后在无血清培养基中饥饿。饥饿24小时后，加入不同剂量的布立尼布。两小时后，加入5ng/mL PDGF-BB。将细胞再孵育72小时并测量细胞活力。每个实验至少重复进行三次。
3）激酶实验
使用杆状病毒表达载体系统在Sf9细胞中表达含有酪氨酸激酶的重组蛋白质，作为GST融合蛋白。所有酶均储存在-80°C。将布立尼布溶于DMSO中并用水/10％DMSO稀释。VEGFR2激酶溶液由8 ng GST-VEGFR2酶、75μg/mL底物、1μMATP和0.04μCi[γ-33P]-ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris（pH 7.0）、25μg/mL BSA、1.5mM MnCl2、0.5mM二硫苏糖醇。Flk-1激酶溶液由10 ng GST-Flk-1酶、75μg/mL底物、1μMATP和0.04μCi[γ-33P]-ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris（pH 7.0）、25μg/mL BSA、4mM MnCl2、0.5mM二硫苏糖醇。将反应物在27℃温育1小时，并用冷的三氯乙酸（TCA）终止至终浓度为15％。将这些TCA沉淀物收集在单过滤板上，并通过液体闪烁计数器定量。
综上所述，布立尼布是一种针对VEGFR2的ATP竞争性抑制剂，其IC50为25 nM，对VEGFR-1和FGFR-1具有中等效力，但对PDGFR-β具有较高选择性。它还具有对其他靶点的活性，如EGFR（>1.9μM）、FGFR1（148nM）、Flk1（89nM）、VEGFR1（380nM）和VEGFR2（25nM）。
1
