该试剂盒采用改进的SDS-碱裂解法来裂解酵母细胞并消化酵母细胞壁，从而在短时间内提取高纯度的质粒DNA。通过去除细胞壁、碱裂解、离心吸附和洗脱等步骤，可以从酵母培养液中分离出纯净的质粒DNA。
1. 首次使用时，将试剂盒中的RNase A加入溶液YP1（终浓度100µg/ml），并将其保存在4℃。如果溶液YP1中的RNase A失活，可以补加RNase A以去除提取的质粒中的微量RNA。
2. 当环境温度较低时，溶液YP2中的SDS可能会析出浑浊或沉淀。可以将其置于37℃水浴中加热几分钟，以恢复澄清状态。避免剧烈摇晃，以免产生过多的泡沫。
3. Lytic Enzyme是一种粘稠的蜗牛酶甘油储液，应小心使用并保存在-20℃。蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中提取的混合酶，含有多种酶，如纤维素酶、果胶酶、淀粉酶和蛋白酶，适用于破碎溶解各种酵母细胞壁。
4. 避免试剂长时间暴露于空气中，以免挥发、氧化或导致pH值变化。使用后，请及时盖紧盖子。
1. 平衡液可以预处理硅胶膜柱，减少柱中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。平衡液是强碱性溶液，使用时请小心避免接触皮肤、眼睛和衣服。使用后请盖紧瓶盖，室温保存。在保存过程中可能会有沉淀生成，可以加热至37℃使沉淀完全消失。
2. 使用方法：将硅胶膜吸附柱装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。以13000 rpm离心1分钟，倒掉废液，然后将吸附柱重新放回收集管。此时，平衡液预处理柱子完毕，可以进行后续操作。
1. 所有离心步骤均在室温下进行，使用转速为13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或类似离心机。
2. 溶液YP3和去蛋白液PE中含有刺激性化合物，操作时应戴乳胶手套，避免接触皮肤、眼睛和衣服。若不慎接触，请用大量清水或生理盐水冲洗。
3. 酵母质粒拷贝数通常很低，难以通过电泳或分光光度计检测。建议使用提取的质粒进行下游试验时，使用量为1-5μl作为PCR模板，使用量为5-10μl用于转化大肠杆菌，选择高效率的感受态细胞。
4. 用户需要自备Sorbitol缓冲液（1M山梨醇，0.1M Na2EDTA，28 mMβ-巯基乙醇）。配制方法：在600 ml去离子水中溶解182.2克山梨醇，加入200 ml 0.5 M Na2EDTA（pH 8.0），无需调节pH值，定容至1L，4℃保存。在使用前加入0.2%β-巯基乙醇。
5. 酿酒酵母细胞的菌体浓度一般在OD600值为1时为1-2x107 cells/ml。由于菌种和分光光度计的差异，即使细胞数量相同，OD值也会有很大变化，以上仅供参考。
6. 洗脱液EB不含螯合剂EDTA，不会影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水进行洗脱，但应确保pH值大于7.5，过低的pH值会影响洗脱效率。用水洗脱的质粒应保存在-20℃。如果需要长期保存质粒DNA，可以使用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但EDTA可能会影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
[1] 酵母高纯度质粒小量快速提取试剂盒产品说明书
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