SUMO蛋白的分布及其制备方法？ ¹

人类基因组编码了四种SUMO蛋白亚型，分别是SUMO1、SUMO2、SUMO3和SUMO4。SUMO1～3在各种组织中广泛表达，而SUMO4主要在肾、脾和淋巴结中表达。SUMO1和SUMO2具有较高的序列同源性，SUMO2和SUMO3也非常相似。因此，抗SUMO2抗体和抗SUMO3抗体在实验中的反应性相似。本文介绍了抗人SUMO3抗体的制备方法。

制备方法

抗人SUMO3抗体的制备步骤如下：

1）引物的设计与合成

根据SUMO3蛋白的编码序列，设计引物对目的片段进行PCR扩增。引物的序列为FP：TTA AGA AGG AGA TAT ACC ATG TCCGAG GAG AAG CCC AAA GAG和RP：GTG GTG GTG GTG GTG CTC GAG GAA ACTGTG CCC TGC CAA GCT。

2）人SUMO3基因原核表达载体的构建

利用PCR扩增SUMO3蛋白的DNA片段，并将其与含有His标签序列的pET-28A质粒进行双酶切。将扩增的PCR产物与酶切后的质粒混合，导入大肠杆菌培养。通过筛选阳性单克隆并进行PCR扩增，得到含有目的DNA片段的重组质粒。

3）人SUMO3蛋白在大肠杆菌中的诱导表达

将重组质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3，选择阳性单克隆进行培养。在37℃的条件下，分别在IPTG的诱导下进行培养。通过SDS-PAGE电泳检测，确定最适合的诱导表达条件。

4）人SUMO3蛋白的分离与纯化

将菌体取出，用裂解缓冲液重悬，并进行超声破菌。通过亲和层析柱和超滤管进行蛋白的纯化。最后，将目的蛋白制成蛋白干粉并保存。

主要参考资料

[1] 抗SＵMＯ抗体在原发性胆汁性胆管炎临床诊疗中的价值