小鼠骨肉瘤成骨细胞的特性及应用研究？ ¹

背景^[1-3]

小鼠骨肉瘤成骨细胞是源自BALB/c小鼠的成骨细胞样贴壁细胞，具有多种细胞抗原表达。此外，它们还表达骨唾液酸蛋白、二聚糖、饰胶蛋白聚糖和骨调素等骨家族细胞特性。

小鼠骨肉瘤成骨细胞可以在无血清的条件下培养，并可用于筛选和鉴定骨肉瘤细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。通过无血清悬浮培养，可以初步富集小鼠骨肉瘤成骨细胞中的肿瘤干细胞，并观察其形态变化和分化过程。

小鼠骨肉瘤成骨细胞

细胞培养步骤：

1）复苏细胞：将冻存管中含有1mL细胞悬液的样品在37℃水浴中迅速解冻，加入5mL培养基混合均匀。离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），并进行过夜培养。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加入1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5mL以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6mL/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6mL培养液的新皿中或者瓶中。

应用^[4][5]

Runx2基因对骨肉瘤细胞的影响及相关机制研究

本研究旨在探讨干扰或转染Runx2基因对小鼠骨肉瘤细胞和人骨肉瘤细胞株HOS的生物学活性的影响，并研究其体内和体外机制。

方法：将Runx2和si Runx2转染到骨肉瘤细胞中，观察细胞的变化。加入IL-6抗体后，检测培养上清液和细胞的变化。将上述细胞注射到BALB/C小鼠体内，待小鼠形成肿瘤后，观察小鼠的肿瘤发生率、肺转移率、生存率和生存周期，并观察各组骨破坏的程度。

结果：si Runx2可以抑制细胞体外增殖，而Runx2则具有相反的作用。转染Runx2可以提高培养上清液中的IL-6水平，并增加RANKL的表达，而si Runx2则产生相反的结果。体内实验发现，si Runx2明显抑制肿瘤生长和转移，并减轻骨质破坏的程度。

结论：干扰Runx2基因表达对骨肉瘤具有明显的治疗效果。

参考文献

[1]Comparative expression of RANK, RANKL, and OPG in keratocystic odontogenic tumors, ameloblastomas, and dentigerous cysts[J]. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology and Endodontology. 2008(3)

[2]Tumor-associated osteoclast activity and aggressiveness of osteosarcoma[J]. Sofia Avnet, Alessandra Longhi, Manuela Salerno, Jussi Halleen, Francesca Perut, Donatella Granchi, Armando Giunti, Nicola Baldini. Bone. 2008

[3]The role of Dkk-1 in human osteosarcoma and its regulation[J]. Helen S. McCarthy, John H. H. Williams, Michael J. Marshall. Bone. 2008

[4]A review of clinical and molecular prognostic factors in osteosarcoma[J]. Jonathan C. M. Clark, Crispin R. Dass, Peter F. M. Choong. Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. 2008(3)

[5]吴丹凯. Runx2基因对骨肉瘤细胞的生物学的影响及相关体内和体外机制的研究[D]. 吉林大学, 2008.