MH-S小鼠肺泡巨噬细胞是通过SV40转化富含粘附细胞鼠肺的小泡巨噬细胞获得的，这些细胞表达CD11b(Mac-1)、II类抗原（IA）、T抗原和白细胞介素1(IL-1)基因。在生长培养基RPMI-1640中加入0.05mMβ-巯基乙醇、10%FBS和1%P/S，并在37℃、95%空气和5%CO2的条件下培养。
MH-S小鼠肺泡巨噬细胞是一种重要的研究工具。
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
可以利用重组腺病毒Ad-Dectin-1体外转染MH-S小鼠肺泡巨噬细胞，构建Dectin-1高表达的细胞模型。
具体的实验方法包括：重组腺病毒Ad-Dectin-1体外转染MH-S细胞（Ad-Dectin-1-EGFP组），观察转染情况；利用MTT法检测细胞增殖情况，确定转染的最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）值；利用Real-time PCR法检测Dectin-1基因mRNA表达量，利用Western blot检测Dectin-1蛋白表达量；利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞膜表面Dectin-1表达情况。同时设置不转染腺病毒的MH-S细胞为空白对照，转染空病毒的MH-S细胞为阴性对照（Ad-EGFP组）。
研究结果表明，重组腺病毒转染MH-S细胞后，Dectin-1基因mRNA和蛋白表达量显著增加，细胞膜表面Dectin-1表达量也显著增加。
因此，重组腺病毒Ad-Dectin-1可用于体外转染MH-S小鼠肺泡巨噬细胞，成功构建了Dectin-1高表达的细胞模型。
[1] Adenoviruses as gene/vaccine delivery vectors: promises and pitfalls[J]. Mohan Babu Appaiahgari, Sudhanshu Vrati. Expert Opinion on Biological Therapy. 2015(3)
[2] Salvage combination antifungal therapy for acute invasive aspergillosis may improve outcomes: a systematic review and meta-analysis[J]. Anil A. Panackal, Emilio Parisini, Michael Proschan. International Journal of Infectious Diseases. 2014
[3] Treatment Options in Invasive Aspergillosis[J]. Anil A. Panackal, John E. Bennett, Peter R. Williamson. Current Treatment Options in Infectious Diseases. 2014(3)
[4] Functional expression of recombinant human macrophageβ-glucan receptor dectin-1 using baculovirus–silkworm expression system[J]. Minoru Ujita, Shota Koike, Yosuke Yamauchi, Noburo Kiochi, Hiroki Yura, Mayumi Yamanaka, Hiroki Okumura. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 2014(7)
[5] 夏迪. 重组腺病毒Ad-Dectin-1转染小鼠肺泡巨噬细胞及其在烟曲霉感染中的作用[D]. 南京大学, 2015.
1
