提问
盖德化工网  >  盖德问答  >  上清电泳一直没有条带...

上清电泳一直没有条带,然而后续纯化却有目的条带,求解答?

上清电泳一直没有条带,然而后续纯化却有目的条带,求解答
曾请教过老师和师兄师姐,给出的原因是上样时的量不够或者上清条带太浅就是无法看清,求小伙伴有没有类似情况的交流分享一下,贴图如下:
M  Blue Plus IV 蛋白Marker
1 His-DSBC-CTLD1诱导前
2 His-DSBC-CTLD1 16℃诱导16h后
3 His-DSBC-CTLD1破碎
4 His-DSBC-CTLD1 破碎上清
5 His-DSBC-CTLD1 破碎沉淀
6 His-DSBC-CTLD1 流穿
7 His-DSBC-CTLD1 20mM咪唑
8 His-DSBC-CTLD1  40mM咪唑
9 His-DSBC-CTLD1  60mM咪唑
10 His-DSBC-CTLD1 80mM咪唑
11 His-DSBC-CTLD1 100mM咪唑
12 His-DSBC-CTLD1 200mM咪唑
13 His-DSBC-CTLD1 500mM咪唑


新建位图图像.jpg
0评论 +关注
共3个回答
推荐一个网站,英格恩生物技术博客,上面有很多实验内容,可以去看看。
看你的电泳,目的蛋白大部分在沉淀里面。就是说形成了包涵体。另外镍柱没必要这样梯度洗脱。用25-50mM咪唑洗脱杂蛋白,然后直接500mM咪唑洗脱就可以了。那些中间浓度是没必要的。亲和纯化没那么多中间状态的蛋白结合 ...
是这样的 我做梯度是因为这个蛋白之前只有纯化镍柱没有摸过条件 我的诱导条件之前有过优化0.02mM,OD大约0.8-1.0 ,16摄氏度诱导16小时左右

改变表达的方式,温度不变,降低诱导剂浓度,缩短诱导时间。过夜太久了。

相关问题
16S菌种鉴定菌株总是不纯!求助大神指点迷津!? 4个回答
蛋白纯化用的最多的方法? 2个回答
pcr空白对照弥散,样本整体弥散? 7个回答
毕赤酵母表达蛋白降解? 1个回答
SacB筛选问题? 1个回答
编辑推荐
三价铬溶液颜色问题? 15个回答
能否用离心代替旋蒸去除乙醇? 2个回答
想请教下靛蓝染料在紫外分光光度计下吸收的问题? 4个回答
硫酸钙结垢,用什么清洗掉? 4个回答
氰基取代苯环上的卤素的反应条件? 0个回答
 
请填写举报原因
选择举报原因
 
增加悬赏
剩余能量值
能量值