如何使用植物基因组DNA提取试剂盒(CTAB粗提法)? ¹

植物基因组DNA提取试剂盒(CTAB粗提法)是一种简单快速提取植物基因组DNA的方法。它通过研磨植物样本，使细胞壁破裂，并使用CTBA抽提液将核酸与植物多糖等杂质分离。

操作方法

1. 使用正压过滤装置，过滤2L水样(蓝藻群体颗粒用滤膜除去过多水分)。将滤膜剪碎并放入50ml离心管中，如果不能及时分析，可以在-20°C保存。

2. 在50ml离心管中加入溶液A(50mM Tris-C1+50mM Na2EDTA+1M NaCl)，然后加入10%十二烷基肌氨酸钠溶液至终浓度为0.1% Sarkosyl，再加入十六烷基三甲基溴化铵(CetylTrimethylAmmoniumBromide)至终浓度为2%。

3. 取适量样本加入离心管中，振荡混匀3分钟，然后在4°C保存。

4. 以8,000rpm离心15分钟，弃液体；用1.5ml溶液B(50mM Tris-C1+50mM Na2EDTA+ImMNaCl)处理样本两次，将细胞重新悬于250ml溶液C(50mM Tris-C1+50mM Na2EDTA+25%蔗糖)，室温放置1小时。

5. 加入溶菌酶至终浓度为10-20mg/ml，并于37°C保温15分钟，用缓冲液D稀释细胞悬液，并继续37°C保温30分钟；加入10%SDS至终浓度1，小心搅匀，继续37°C保温1小时，直至悬液变粘。

6. 加入蛋白酶K至终浓度100ug/ml，再于37°C保温2小时。

7. 用酚/氯仿(25:24)抽提一次，用无水乙醇沉淀核酸，4°C放置1小时或过夜；离心沉淀核酸并晾干。

8. 将沉淀溶于TE缓冲液中，加入Rnase消化RNA，然后用酚/氯仿抽提一次，再用氯仿抽提一次，加入5M NaCl至终浓度为1M，并用冰冷乙醇沉淀DNA，4°C放置1小时或过夜，离心沉淀DNA，并将其溶于TE缓冲液中。

9. 对质检结果不理想的样本，可以使用PowerClean DNAClean-Upkit进行纯化。

10. 提取好的DNA可以在-20°C保存。

主要参考文献

[1] 雷娅红 进境多年生黑麦草和白三叶种带真菌多样性研究 兰州大学 硕士生学位论文。

[2] 张军毅 太湖蓝藻水华的宏基因组学研究 东南大学 博士学位论文。