大鼠肝细胞BRL-3A的特点是什么? ¹

该细胞株的名称是BRL-3A，属于大鼠肝细胞，经过种属鉴定确认。

细胞来源于肝脏组织，具有贴壁生长特性。

细胞形态呈现上皮细胞样。

该细胞的生物安全等级为1。

生长培养基的配方为DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)。

推荐的传代比例为1:2-1:4。

推荐的换液频率为每周2~3次。

冻存条件为冻存液: 55%基础培养基+40%FBS + 5%DMSO，存放在液氮中。

细胞的培养条件为气相:空气, 95%; CO₂, 5%；温度: 37°C。

该细胞株由RCB机构（RCB0273）进行保藏。

如何操作收到的细胞？

收到细胞后，首先用75%酒精喷洒整个管子进行消毒，然后将小管中的细胞转移到T25培养瓶或6cm培养皿中（无需离心），加入约5ml含FBS的培养基，放入培养箱中过夜培养。之后，检查细胞的汇合度：如果汇合度未超过80%，则继续换液并继续培养，根据需要进行传代或冻存。如果汇合度超过80%，则可以直接进行传代（采用细胞贴壁处理方法）。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗涤1-2次。

2. 在培养瓶中加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），将培养瓶倒置放入37℃培养箱中预热1-3分钟，然后将培养瓶翻转，使胰酶与细胞接触10-30秒，通过倒置显微镜观察细胞的消化情况，如果大部分细胞变圆，则迅速将培养瓶取回操作台，在轻轻敲击培养瓶后加入少量完全培养基以终止消化。

3. 补充6-8ml完全培养基，轻轻混合后吸出一半，分装到新的培养瓶中。一般情况下，收到细胞后的第一次传代是一传三。

主要参考文献

[1] 姚娟娟，周晓蓉，牛廷勇；单壁碳纳米管对大鼠肝细胞株BRL-3A的毒性作用。《毒理学杂志》。