提问
盖德化工网  >  盖德问答  >  如何利用GST pu...

如何利用GST pulldown试剂盒进行蛋白相互作用检测? 1

0评论 +关注
共1个回答

GST pulldown试剂盒是一种利用重组技术进行蛋白相互作用检测的方法。该试剂盒利用GST融合蛋白与目的蛋白的相互作用,通过GST与固相化在载体上的GTH亲和结合,从而实现蛋白的纯化和分离。

GST-pulldown方法主要包括三个步骤:首先,利用基因重组技术构建带有GST标签的原核表达载体;其次,通过原核表达系统表达带有GST标签的融合蛋白;最后,利用GST亲和纯化柱进行蛋白纯化,获得高纯度的融合蛋白,并进行蛋白间的相互作用检测。

该方法的基本原理是将目的蛋白与GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物。当目的蛋白溶液经过柱时,可以捕获与之相互作用的目的蛋白,然后通过SDS-PAGE电泳分析,证实两种蛋白间的相互作用或筛选出相应的目的蛋白。

为了获得可靠的实验结果,需要注意以下几点:首先,获得高纯度的GST融合蛋白可以减少实验的假阳性结果;其次,对融合蛋白进行质量控制,以确保蛋白的正确折叠;最后,在实验中加入核酸酶可以消除可能桥接到蛋白上的DNA和RNA,避免其对蛋白间相互作用的干扰。

GST pulldown试剂盒的应用

GST pulldown试剂盒可用于验证已知蛋白的相互作用,或筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。例如,在青岛文昌鱼GST和FREP基因的研究中,利用GST pulldown试剂盒从青岛文昌鱼肠cDNA文库中分离出与脊椎动物肝脏功能相关的谷胱苷肽转硫酶(GST)和纤维蛋白原相关蛋白(FREP)基因,并对它们的结构、进化、表达和功能进行了研究。

参考文献

[1] Pathogen Recognition and Innate Immunity[J]. Shizuo Akira, Satoshi Uematsu, Osamu Takeuchi. Cell. 2006(4)

[2] Presence and localization of antithrombin and its regulation after acute lipopolysaccharide exposure in amphioxus, with implications for the origin of vertebrate liver[J]. Yujun Liang, Shicui Zhang, Limin Lun, Li Han. Cell and Tissue Research. 2006(3)

[3] Infectious non-self recognition in invertebrates: lessons from Drosophila and other insect models[J]. Julien Royet. Molecular Immunology. 2004(11)

[4] The chordate amphioxus: an emerging model organism for developmental biology[J]. L.Z. Holland, V. Laudet, M. Schubert. Cellular and Molecular Life Sciences. 2004(18)

[5] Cloning and phylogenetic analysis of an amphioxus myogenic bHLH gene AmphiMDF[J]. Jinduo Yuan, Shicui Zhang, Zhenhui Liu, Zhidong Luan, Gengxi Hu. Biochemical and Biophysical Research Communications. 2003(4)

[6] Pattern recognition proteins in Manduca sexta plasma[J]. X.-Q. Yu, Y.-F. Zhu, C. Ma, J.A. Fabrick, M.R. Kanost. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 2002(10)

[7] The Role of Ficolins in Innate Immunity[J]. Misao Matsushita, Teizo Fujita. Immunobiology. 2002(4)

[8] Ascidian and Amphioxus Adh Genes Correlate Functional and Molecular Features of the ADH Family Expansion During Vertebrate Evolution[J]. Cristian Ca?estro, Ricard Albalat, Lars Hjelmqvist, Laura Godoy, Hans J?rnvall, Roser Gonzàlez-Duarte. Journal of Molecular Evolution. 2002(1)

[9] Bioinformatic tools for DNA/protein sequence analysis, functional assignment of genes and protein classification[J]. B. Rehm. Applied Microbiology and Biotechnology. 2001(5-6)

[10] Parasite-responsive IgSF members in the snail Biomphalaria glabrata: characterization of novel genes with tandemly arranged IgSF domains and a fibrinogen domain[J]. Si-Ming Zhang, Pascale M.Léonard, Coen M. Adema, Eric S. Loker. Immunogenetics. 2001(8)

相关问题
柴油加氢裂化因焦化装置切塔时焦化柴油携带杂质导致过滤器冲洗? 0个回答
如何防止气化炉渣水处理开停车期间灰水管道垢片脱落? 0个回答
BGA、CSP封装中的球窝缺陷? 1个回答
锂电池涂布行业中,挤压模头使用的垫片厚度大家是怎么计算出来? 0个回答
多糖提取后,加乙醇沉淀产生絮状物,为什么离心后上层有絮状物? 0个回答
编辑推荐
三价铬溶液颜色问题? 15个回答
能否用离心代替旋蒸去除乙醇? 2个回答
想请教下靛蓝染料在紫外分光光度计下吸收的问题? 4个回答
硫酸钙结垢,用什么清洗掉? 4个回答
氰基取代苯环上的卤素的反应条件? 0个回答
 
请填写举报原因
选择举报原因
 
增加悬赏
剩余能量值
能量值