细胞转染是一种将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术,已成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在生物学试验中,细胞转染被广泛应用于研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等领域。由于不同细胞在生理代谢和分裂方面存在差异,研究者需要选择不同的转染方式。
目前,将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类:脂质体(或脂质体替代物)转染、电转和病毒感染。这三种方法各有优劣。脂质体或脂质体替代物转染操作简便、价格低廉,但对细胞有毒性,并且某些细胞的转染效率很低;电转操作方便快捷,但需要专门的仪器,对细胞损伤较大;病毒感染克服了前两种方法的劣势,感染效率高,对细胞毒性小,但病毒前期包装需要大量时间和精力。
1、转染试剂的准备
a. 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。
b. 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。
2、选择合适的混合比例(1:1 - 1:2 / 脂质体体积: DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后再加入合适体积的转染试剂,再次震荡。
[1] 胡英,金一;阳离子膜融合脂质体的细胞转染机制及其保护作用。《中国药学杂志》