人I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒用于测定血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人I型原胶原N端前肽（PINP）的含量。
实验原理：通过将抗人PINP单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的PINP与单抗结合，加入生物素化的抗人PINP，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测定OD值，PINP浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中PINP浓度。
人I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒
1）使用前，将所有试剂充分混匀。避免产生大量泡沫，以免加样时加入气泡导致误差。
2）根据待测样品数量和标准品的数量确定所需的板条数。建议每个标准品和空白孔做复孔。每个样品根据数量尽量做复孔。将稀释好的标本加入50ul到反应孔内。
3）加入稀释好的标准品50ul到反应孔，加入待测样品50ul到反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果使用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
通过对绝经后骨质疏松症患者的临床研究，本研究旨在观察补肾通络方对该类患者骨密度、骨代谢指标的影响，以及对Wnt/β-catenin和OPG/RANKL/RANK两条信号通路的调控作用，以探讨补肾通络方对骨质疏松的治疗作用及分子机制。
方法：选取绝经后骨质疏松患者60例，随机分成阿仑膦酸钠组和补肾通络方（BSTL）组，每组30例。所有患者均同时服用钙尔奇D（600mg，每日1片），疗程为3个月，在观察期间不使用其他治疗骨质疏松的中西药物。治疗前后检测、记录所有患者的一般资料、腰椎L1-4骨密度（BMD）、T值、血Ca、血P、碱性磷酸酶、骨钙素、血清β-catenin、RANKL、OPG水平。
结果：补肾通络方组患者经治疗3个月后复查腰椎BMD及T值、血钙、血磷水平均显著性升高（P<0.05），碱性磷酸酶、骨钙素、I型原胶原分子N端前肽（PINP）、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽（CTX）水平均显著性降低（P<0.05），而雌二醇、钙/肌酐（尿）与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）。
[1] Involvement of WNT/β-catenin Signaling in the Treatment of Osteoporosis[J]. Maurizio Rossini, Davide Gatti, Silvano Adami. Calcified Tissue International. 2013(2)
[2] BMP‐2 Controls Alkaline Phosphatase Expression and Osteoblast Mineralization by a Wnt Autocrine Loop[J]. Georges Rawadi, Béatrice Vayssière, Fred Dunn, Roland Baron, Sergio Roman‐Roman. J Bone Miner Res. 2009(10)
[3] Functions of RANKL/RANK/OPG in bone modeling and remodeling[J]. Brendan F. Boyce, Lianping Xing. Archives of Biochemistry and Biophysics. 2008(2)
[4] Icaritin and its glycosides enhance osteoblastic, but suppress osteoclastic, differentiation and activity in vitro[J]. Jian Huang, Lan Yuan, Xi Wang, Tian-Lan Zhang, Kui Wang. Life Sciences. 2007(10)
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